Mik azok a választható kultúrmédiumok? A táptalajok osztályozása és előállításuk módszerei Választható táptalaj alkalmazási példák célja.
A tápközegek, és különösen a sűrű táptalajok kifejlesztése a különböző típusú mikroorganizmusok számára lehetővé tette kulturális, biokémiai, antigén és virulens tulajdonságaik tanulmányozását.
Pasteur folyékony infúziókat használt a mikrobák tenyésztésére. A szilárd táptalaj első kifejlesztői Koch és tanítványai voltak. Ők alkalmaztak először burgonyát, alvasztott tejsavót, zselatint és húskivonatos agart.
A szilárd táptalaj lehetővé tette tiszta mikrobakultúrák előállítását és tulajdonságaik tanulmányozását.
Lehetővé vált számos fertőző betegség etiológiai tényezőinek meghatározása, valamint megelőző és terápiás gyógyszerek kidolgozása.
A szilárd táptalajon, laboratóriumi körülmények között végzett mikrobák tenyésztése a tiszta tenyészetek előállítása révén lehetővé tette, hogy ne csak vakcinák és diagnosztika létrehozásán dolgozzanak, hanem a terápiás célra használt kemoterápiás gyógyszerek és antibiotikumok hatásspektrumát is tanulmányozzák. valamint a megelőző célokra használt vegyszerek hatásának tanulmányozására, az aktuális és végső fertőtlenítésre.
A laboratóriumi diagnózis felállítása a tiszta tenyészetben nyert mikroorganizmusok szisztematikus helyzetének tisztázásával jár (a tiszta tenyészet azonos fajba tartozó mikrobák gyűjteménye táptalajon).
A tiszta tenyészet beszerzése gyakran szükséges feltétel a páciensből izolált mikroorganizmusok tanulmányozásakor.
A mikroorganizmusok fajtájának meghatározása magában foglalja a mikroorganizmusok számos jellemzőjének meghatározását: sejtmorfológia, a tenyészet növekedésének természete a különböző tápközegeken, bizonyos kémiai vegyületek felhasználásának képessége, kapcsolat a hőmérséklettel, a környezet pH-jával, oxigénnel stb. , a mikroorganizmusok fajainak meghatározásához gyakran szükséges ismerni az anyagcseretermékeket, az antigén tulajdonságokat, a sejtek nukleotid összetételét, az enzimkészlethez kapcsolódó biokémiai aktivitást és még sok mást.
Mindezen jellemzők meghatározása lehetővé teszi a mikroorganizmusok azonosítását.
A mikroorganizmusok azonosítása nagyon fontos a fertőzések diagnosztizálásában, a kórokozó forrásainak és átviteli útvonalainak megállapításában.
Ahhoz, hogy bármely mikroorganizmust azonosítani lehessen, az egyedeket tiszta kultúrában és a szükséges mennyiségben kell felhalmozni.
A mikroorganizmusok izolálására, tenyésztésére, felhalmozására és megőrzésére olyan tápközeget használnak, amely tartalmazza a mikrobák számára szükséges összes tápanyagot, és szimulálja a mikroorganizmusok természetes körülmények közötti élőhelyét.
Minden táptalajnak meg kell felelnie a következő követelményeknek:
1) tápanyagok és növekedési faktorok jelenléte könnyen emészthető formában;
2) sterilitás – életképes mikroorganizmusok és spórák hiánya;
3) izotonicitás - azonos ásványi sók tartalma a sejten belül és kívül. Azon patogén mikroorganizmusok esetében, amelyek alkalmazkodtak az emberi testben való hosszú tartózkodáshoz, a 0,85% -os nátrium-klorid-oldatot izotóniásnak tekintik. Például az óceánban (sós vízben) élő mikroorganizmusok esetében az izotonicitást az eltérő sókoncentráció hozza létre, de a tápközeg izotóniájára vonatkozó követelmény továbbra is fennáll;
4) a környezet optimális pH-ja. A tápközeg redox potenciálját a hidrogénionok hozzák létre, ami hozzájárul a mikrobiális enzimek normál működéséhez;
5) a környezet átláthatósága. Mivel a legtöbb baktérium, a táptalajokon a növekedés egyik fő jele a zavarosság (folyékony táptalajokon - zavarosság, üledék, film vagy kevert; szilárd táptalajokon - telepek kialakulása).
Egyes mikroorganizmusok táptalajokon való szaporodásának legfontosabb jellemzője: leptospira esetében - a tápközeg zavarosságának hiánya (e mikroorganizmusok növekedésének és szaporodásának megfigyelése fáziskontraszt mikroszkóppal történik), mikoplazmák és a kórokozók esetében tuberkulózis kórokozója - lassú növekedés (zavarosság vagy telepek megjelenése legkorábban 21 nap múlva, vagy még később).
A tápközegek a mikrobiológiai munka alapját képezik, és minőségük gyakran meghatározza a vizsgálat eredményeit. Ezért a táptalaj kiválasztásakor figyelembe kell venni mind a mikrobák létfontosságú funkcióinak fenntartásához szükséges anyagokkal szembeni igényeit, mind azt, hogy adott körülmények között képesek-e lebonyolítani a sejt és a környezet közötti anyagcserét.
A tápközegnek optimális (legjobb) feltételeket kell teremtenie a mikrobák életéhez.
A bioszintézis, növekedés és szaporodás lebonyolításához a sejtnek kívülről kell megkapnia a szükséges mennyiségben a benne lévő összes elemet, és energiaforrással kell ellátnia. Annak megfelelően, hogy pontosan milyen elemek kerülnek a sejtbe, a tápközeg anyagait szén-, nitrogén-, foszfor-, kén- stb. forrásoknak nevezzük.
A mikroorganizmusok szintetikus képességei határozzák meg, hogy milyen vegyületek formájában kell a közegbe bevinni az építő jellegű elemeket.
Az energiaforrás formáját az előállítás módja határozza meg.
A mikroorganizmusok szintetikus képességei és energiaszerzési módjai rendkívül változatosak, ezért eltérő az élelmiszer-szükségleteik is. Ezt a tényt figyelembe kell venni a táptalajok készítésekor, világosan felismerve, hogy nem léteznek olyan univerzális táptalajok, amelyek kivétel nélkül minden mikroorganizmus szaporodására alkalmasak.
Így a tápközeg összetételét elsősorban a mikroorganizmusok anyagcseréjének jellemzői és változatossága határozza meg.
A mikroorganizmusok számára, más élőlényekhez hasonlóan, a szükséges tápanyagok a szén, nitrogén, kén, foszfor, hamuelemek, számos mikroorganizmus számára pedig különféle kiegészítő tápanyagok, például vitaminok, növekedési faktorok stb.
Sok mikroorganizmusnak, mint például a magasabb rendű állatoknak, a normál szén-, nitrogén-, ásványi sók és más, őket energiaforrásként és szintézisanyagként szolgáló elemeken kívül igen jelentős növekedési faktorokra is szükség van. A növekedési faktorok jellemzője rendkívül kis mennyiségben történő aktivitásuk.
A növekedési faktort először Wilde fedezte fel 1901-ben élesztőtenyésztés közben. Észrevette, hogy amikor egy szintetikus táptalajt kis mennyiségű élesztővel oltottak be, nem figyeltek meg növekedést. Ha azonban az élesztő vetésével egyidejűleg forralással elpusztított élesztőt adunk a táptalajhoz, megjelenik a növekedés. Wilde ezt a jelenséget egy bizonyos növekedési faktor jelenlétével magyarázta az élesztősejtben, amelyet „BIOS-nak” nevezett.
A BIOS természetének tanulmányozása kimutatta, hogy több összetevő keveréke. A BIOS két részre oszlik: „BIOS”-1 és „BIOS” -2. Mindkét frakció külön-külön véve inaktív. A mikrobák növekedését serkentő képességük csak akkor következik be, ha együtt hatnak. A „BIOS”-1 egy inozit, a „BIOS”-2 heterociklusos gyűrűt tartalmaz szabad karboxilcsoporttal.
A BIOS-hoz hasonló anyagokról kiderült, hogy számos mikroorganizmus növekedési faktoraként szükségesek. Egyes mikroorganizmusok megkövetelik B-vitamin hozzáadását a tápközeghez.
B-vitamin-szükségletük alapján a baktériumokat négy csoportra osztják:
a) B-vitamint nem tartalmazó lében szaporodó baktériumok. Ezek a baktériumok nem szaporodnak szintetikus közegben (tífusz- és vérhasbacilusok, pyogenic staphylococcusok);
b) olyan baktériumok, amelyek nem igényelnek külső B-vitamin-ellátást. Ezek a baktériumok vitaminmentes táptalajban és szintetikus táptalajban (Escherichia coli, Vibrio cholerae, Pseudomonas aeruginosa, lépfene stb.) szaporodnak. Az ebbe a csoportba tartozó mikrobák maguk is képesek szintetizálni a B-vitamint;
c) vitaminmentes táptalajon rosszul szaporodó baktériumok (meningococcus, a diftéria kórokozója);
d) vitaminmentes táptalajon nem szaporodó baktériumok (hemolitikus streptococcus, pneumococcus).
Megállapítást nyert, hogy a B-vitaminok serkentik a növekedést és a savképződést a propionsav- és tejsavbaktériumokban.
Az influenza bacillusának, a szamárköhögés és a szamárköhögés kórokozóinak X és Y faktorokból álló növekedési faktorra van szüksége. Mindkét tényező megtalálható a vérben, valamint a burgonyában és más növényi kivonatokban.
Az X-faktor hőstabil, ez hematin, és helyettesíthető néhány szervetlen vasvegyülettel, amelyek oxid vagy kataláz aktivitással rendelkeznek. A hematin és más vasvegyületek szükségesek a légzési folyamatokban részt vevő citokrómok szintéziséhez.
Az Y - faktor vitamin jellegű, az autoklávozás során elpusztul, baktériumok, élesztőgombák, állati és növényi sejtek termelik.
Anaerob mikroba Bac. A sporogenes telítetlen zsírsavat használ növekedési faktorként. Jelenléte a Cl.botulinum és a Cl növekedéséhez is szükséges. Perfringens. Ezt az anyagot számos aerob baktérium alkotja, például tífusz, tuberkulózisbacilusok és penészgombák. Nyilvánvaló, hogy ez az anyag minden mikroorganizmus életéhez szükséges, de az anaerob clostridiumok nem képesek maguk szintetizálni.
A pantoténsav nagyon aktív, univerzális biológiai eloszlású növekedési faktor. A nikotinsavamid a sztafilokokkuszok növekedési faktoraként szolgál. Enélkül a staphylococcusok nem szaporodnak hidrolizált zselatint, triptofánt, tirozint, cisztint és glükózt tartalmazó szintetikus táptalajon. A nikotinamidot a bél- és tífuszbacilusok, valamint a Vibrio cholerae szintetizálják.
A növekedési faktorok közé tartoznak bizonyos aminosavak (szükségesek a fehérjeszintézishez), purin- és pirimidinbázisok (nukleinsavak előállításához használják), stb. Számos növekedési faktor különféle enzimek része, és katalizátorként játszik szerepet a biológiai folyamatokban. A bakteriális növekedési faktorok kérdése nagyon fontos. Egyrészt segít megérteni a húsvíz élettani szerepét, amelyből laboratóriumi táptalajokat készítenek számos mikroorganizmus tenyésztéséhez. Másrészt a növekedési faktorok kérdésének megoldása lehetővé teszi a szintetikus táptalajok szélesebb körű alkalmazását mikrobák tenyésztésére.
Ugyanazon mikroorganizmus tápközegei a vizsgálat célkitűzéseitől függően eltérőek lehetnek. Például a mikrobakultúrák létfontosságú aktivitásának hosszú távú fenntartására alkalmas táptalajok nagymértékben eltérhetnek az egyes anyagcseretermékek előállítására szánt tápközegektől, amikor a mikrobák élettevékenységének bizonyos aspektusait serkenteni kell. A spórák és más életciklus-formák kialakulásához speciális környezetre van szükség.
Ha lehetséges, a tápközegeket szabványosítani kell, azaz állandó mennyiségben tartalmazniuk kell az egyes összetevőket. A növények növekedésének és a környezet idegen mikroorganizmusok általi szennyezettségének nyomon követésének megkönnyítése érdekében a tápközegnek átlátszónak kell lennie.
A tápközegeket összetételük alapján természetes, szintetikus és félszintetikusra osztják.
A természetes közegeket általában állati vagy növényi eredetű termékekből álló, összetett, bizonytalan kémiai összetételű közegeknek nevezik. Az ilyen közegek alapja a zöld növények különböző részei, állati szövetek, maláta, élesztő, gyümölcsök, zöldségek, trágya, talaj, tengervíz, tavak és ásványforrások. Legtöbbjüket kivonatok vagy infúziók formájában használják.
Sok mikroorganizmus jól fejlődik természetes tápközegben, mivel az ilyen táptalajok általában tartalmazzák a mikrobák növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges összes összetevőt. A bizonytalan összetételű közegek azonban kevéssé hasznosak a mikroorganizmusok anyagcseréjének fiziológiájának tanulmányozására, mivel nem teszik lehetővé a táptalaj számos összetevőjének elfogyasztását, és nem teszik lehetővé, hogy kiderítsék, milyen anyagok képződnek közben. mikroorganizmusok fejlődése.
A bizonytalan összetételű természetes táptalajokat főként mikroorganizmus-tenyészetek fenntartására, biomassza felhalmozására és diagnosztikai célokra használják.
A bizonytalan összetételű közegek közé tartoznak az úgynevezett félszintetikus közegek is. Összetételük az ismert kémiai természetű vegyületekkel együtt bizonytalan összetételű anyagokat is tartalmaz. Az ilyen táptalajokat különösen széles körben használják az ipari mikrobiológiában aminosavak, vitaminok, antibiotikumok és más fontos mikrobiális aktivitású termékek előállítására.
Ilyen közeg például a húspeptonleves (MPB), amely a húskivonattal és az összetett összetételű peptonnal együtt nátrium-kloridot, kálium-foszfátot és néha glükózt vagy szacharózt is tartalmaz. A félszintetikus táptalajok közé tartozik a glükózt és peptont tartalmazó burgonya táptalaj is.
A szintetikus közegek olyan közegek, amelyek csak bizonyos, vegytiszta vegyületeket tartalmaznak, pontosan a megadott koncentrációban.
A szintetikus közegek a legkényelmesebbek a mikroorganizmusok anyagcseréjének tanulmányozására. A környezetbe kerülő komponensek pontos összetételének és mennyiségének ismeretében lehetőség nyílik ezek elfogyasztásának, átalakulásának a megfelelő anyagcseretermékekké tanulmányozására.
A tápközegek szelektívek, differenciáldiagnosztikai és tartósítószerek.
A választható tápközeget S.N. Vinogradsky és M. Beyerinck vezette be a mikrobiológiai gyakorlatba. Ezek olyan tápközegek, amelyekben egy vagy több kémiai vegyület hozzáadásával optimális feltételeket teremtenek egy mikroorganizmustípus (vagy rokon mikroorganizmusok csoportja) növekedéséhez és szaporodásához, és kedvezőtlen feltételeket teremtenek az összes többi számára. Az ilyen táptalajokat főként a mikroorganizmusok tiszta kultúrájának természetes élőhelyükről történő izolálására és kultúrák tömegének felhalmozására használják (kémiai módszer a tiszta kultúra izolálására). Például a táptalaj, amely a koagulált lószérum, szelektív táptalaj a diftéria baktériumok számára, lúgos peptonvíz a Vibrio cholera, az epeleves a tífusz kórokozója számára, a májleves a Brucella stb.
A mikrobák szelektív tápközegben történő felhalmozódása sok esetben fontos előlépésként szolgál a tiszta tenyészetek eredeti vizsgálati anyagokból (például Vibrio cholerae vagy tífuszbaktériumok a betegek ürülékéből vagy a hordozókból stb.) történő elkülönítésében.
A differenciáldiagnosztikai közegek azok a közegek, amelyek a mikroorganizmusok növekedését és fejlődését biztosító anyagokon kívül bizonyos enzimek szubsztrátjaként használt anyagokat is tartalmaznak. A szubsztrát minőségi változása alapján meghatározzák egy adott enzim jelenlétét (egy olyan indikátor segítségével értékelik, amely reagál a tápközegben lévő szubsztrát bomlástermékek jelenlétére).
A mikroorganizmusok mindegyik típusát egy meglehetősen stabil enzimkészlet jellemzi. Az enzimkészlet differenciáldiagnosztikai közegekkel történő meghatározása lehetővé teszi a mikroorganizmusok típusainak megkülönböztetését. Például a véragar lehetővé teszi a hemolizin enzim kimutatását, a His media - szacharolitikus enzimek (szénhidrázok), a zselatint a mikrobák proteolitikus tulajdonságainak figyelembevételére használják stb.
Véragar. A hemolizin enzim jelenlétét a vörösvértestek pusztulása és a vér agaron tenyésztett mikrobák körüli világos zóna kialakulása alapján ítélik meg.
A médiája. A szénhidrátokat savvá bontó enzimek - szénhidrázok jelenlétét a tápközeg pH-értékének savas oldal felé történő változása és a tápközeg színének megváltozása jelzi. Az enzimkészlet különbsége felhasználható az izolált tenyészet tisztaságának ellenőrzésére, valamint az egyik faj gyors megkülönböztetésére a fertőző anyag beoltásának kezdeti vizsgálata során.
A tartósító közeg a vizsgálati anyag elsődleges oltására és szállítására szolgál. Megakadályozzák a kórokozó mikroorganizmusok pusztulását és elnyomják a szaprofiták fejlődését. Példa erre a glicerin keverék, amelyet bizonyos típusú baktériumok kimutatására végzett vizsgálatok során székletgyűjtésre használnak.
Fizikai állapotuk alapján a közegeket folyékonyra, sűrűre, félfolyékonyra és szemcsésre osztják. A mikroorganizmusok élettani és biokémiai jellemzőinek tisztázására, valamint biomasszájuk vagy anyagcseretermékeik felhalmozására a legkényelmesebb a folyékony táptalaj használata. A szilárd táptalajokat tiszta kultúrák izolálására, izolált telepek előállítására, tenyészetek tárolására és a mikroorganizmusok mennyiségi meghatározására, antagonista tulajdonságaik meghatározására és számos más esetben használják. A félig szilárd táptalajokat jellemzően a mikrobiális kultúrák hosszabb távú tárolására használják. A táptalaj tömörítéséhez agart használnak - agart, zselatint és kovasavgélt.
Az ipari mikrobiológiában úgynevezett ömlesztett táptalajokat használnak. Ilyen közegek például a főtt köles, tápoldatba áztatott korpa stb.
A tápközeg lehet egyszerű vagy összetett. Az egyszerű folyékony tápközegek közé tartozik a peptonvíz, a hús-peptonleves (MPB). A sűrű, egyszerű tápközegek közé tartozik a hús - pepton agar (MPA) és a hús - pepton zselatin.
Az egyszerű tápközegek, különösen az MPB és az MPA alapul szolgálnak ahhoz, hogy bonyolultabb táptalajokat készítsünk belőlük különféle anyagok hozzáadásával, amelyek növelik a szubsztrátum tápértékét. Például glükóz hozzáadásával cukorleves vagy cukoragar keletkezik; ascites - agar és ascites - húsleves aszcitikus folyadék hozzáadásával nyerjük; A teljes vér a véragar és a vérleves összetevője, és a vérszérum hozzáadásával szérum táptalaj (agar vagy húsleves) keletkezik.
A bonyolultabb összetételű táptalajokat általában olyan mikrobák tenyésztésére szánják, amelyek igényesek a tápanyaghordozókra, és nem szaporodnak egyszerű táptalajokon. Ilyen mikroorganizmusok közé tartoznak a gonorrhoea, a diftéria, a brucellózis, a tularemia, a szifilisz, a visszaeső láz, a rhinoscleroma, a tuberkulózis stb. kórokozói.
A tápközegeket a kezdeti komponensek, konzisztencia, tervezett cél és kémiai összetétel szerint osztályozzák.
A kémiai összetételtől és a kiindulási komponensektől függően a tápközegek következő típusait különböztetjük meg.
Bizonytalan kémiai összetételű környezetek. A következőkre oszthatók: 1) állati eredetű táptalajok (kezdeti termékek - hús, hal, tojás, tej stb.); 2) növényi eredetű táptalajok (kezdeti termékek - szójabab, borsó, burgonya, sárgarépa stb.).
Egyes termékeket természetes formában (burgonya, sárgarépa, tej stb.) használnak fel, de gyakrabban vetik alá az állati és növényi szöveteket különféle feldolgozásoknak (extrakció, enzimes vagy savas hidrolízis).
Ismert kémiai összetételű közeg(szintetikus). Ismert kémiai vegyületeket (sók, szénhidrátok, aminosavak, vitaminok stb.) tartalmaznak optimális mennyiségi arányban. A szintetikus tápközeget akkor alkalmazzák, ha a megnövekedett sejttömeget maximálisan meg kell szabadítani a hagyományos tápközegben található ballaszt szerves vegyületektől, például diagnosztikai allergének kinyerésekor vagy egy mikroorganizmus anyagcsere-szükségletének tanulmányozásakor egy adott kémiai vegyületre.
A konzisztencia alapján a tápközegeket szilárdra, félfolyékonyra és folyékonyra különböztetik meg.
Folyékony tápközeg. Kivonatok, hidrolizátumok, kiindulási termékek oldatai felhasználásával készült.
Félfolyékony és szilárd tápközeg. A kívánt konzisztenciát különféle tömítőanyagok hozzáadásával biztosítják a közegnek.
Az agar-agar (malájzselé) egy poliszacharid, bizonyos hínárok feldolgozásának terméke. 80...86 ºС-on olvad, 40 ºС-on megkeményedik. Sűrű közeg előállításához 1,5...2%, ritkábban 3% mennyiségben adják hozzá; félfolyékony - 0,3...0,7%.
A zselatin sok kollagént tartalmazó szövetekből származó kivonat (csontok, porcok, inak stb.). A zselatin gél 25 °C-on olvad, ami kényelmetlenné teszi a 37...38 °C hőmérsékleti optimumú mikroorganizmusok szaporodását. Ezenkívül számos baktérium választ ki proteolitikus enzimeket, amelyek lebontják a zselatint. Jellemzően 10...20% zselatint adunk a táptalajhoz.
Rendeltetésük szerint megkülönböztetnek általánosan használt (bázis), dúsított, speciális, szelektív (szelektív) és differenciáldiagnosztikai tápközeget.
Közös (alap) környezetek. Viszonylag szerény mikroorganizmusok tenyésztésére használják.
A bázikus táptalajok készítésének kiindulási komponensei leggyakrabban húsvíz, Hottinger-emésztés és növényi hidrolizátumok.
Húsvíz: a marhahúst megszabadítják a csontoktól, zsíroktól, inaktól és húsdarálón engedik át. A darált húst 1:2 arányban csapvízzel felöntjük, 1 órán át forraljuk, a húsvizet lehűtjük, vatta-gézszűrőn átszűrjük, majd csapvízzel az eredeti térfogatig felöntjük. tartályokba, pamut-gézdugóval le kell zárni és 120 °C-on 20 percig sterilizálni.
A Hottinger-féle emésztést húshulladékból triptikus hidrolízissel állítják elő. A zsírt, a fasciát, az inakat apróra vágjuk, 1:2 arányban forrásban lévő vízzel felöntjük, felforraljuk, 45 °C-ra hűtjük, és pankreatint adunk hozzá, nátrium-karbonát oldattal 7,8-8,0 pH-ra lúgosítjuk, összerázzuk és kloroformot adunk hozzá. (10 ml/l), szorosan lezárva, 10 napig meleg helyen tartva hidrolízisterméket (emésztést) kapunk.
Hús-pepton húsleves (MPB). 1 liter húsvízhez adjunk 1% peptont és 0,5% nátrium-kloridot, beállítva
Rizs. 32. Agar ferde készítése
A kívánt pH-t 10%-os nátrium-hidroxid- vagy kálium-hidroxid-oldat frakcionált hozzáadásával érik el. Papírszűrőn átszűrjük, lombikokba, kémcsövekbe töltjük és 120 °C-on 15...20 percig sterilizáljuk.
Hús-pepton agar (MPA): 2...3% megmosott, apróra vágott agar-agart adunk az MPB-hez, addig melegítjük, amíg az agar elolvad, felforraljuk, forrón ellenőrizzük a pH-t, majd szükség esetén hozzuk. a kívánt értékre ( 7,2...7,6), pamut-gézszűrőn átszűrjük. A szűrt forró agart kémcsövekbe és lombikokba öntjük, autoklávozással 1 atm nyomáson 20...30 percig sterilizáljuk. Az oltásra alkalmas ferde agarfelület elérése érdekében a sterilizálás után az olvadt MPA-t tartalmazó csöveket szobahőmérsékleten hagyjuk, amíg ferde helyzetben össze nem tömörül (a dugós vége felemelkedik) (32. ábra).
Széles körben alkalmazzák a mikroorganizmusok tenyésztését szilárd táptalajokon Petri-csészékben. Egy szabványos Petri-csésze átmérője (33. ábra) körülbelül 10 cm kisebb és nagyobb átmérőjű, valamint eldobható műanyag csészéket is gyártanak. BAN BEN
szabványos steril Petri-csészéket égő lángra öntünk kb. 20 ml olvasztott és 45...50 "C-os tápagarra hűtve, az edényeket vízszintes felületre helyezzük, amíg az agar megkeményedik.
A félig folyékony hús-pepton agart (MPA) az MPA-hoz hasonlóan készítik, de 0,25% agart adnak hozzá. Keverés közben forraljuk, amíg az agar teljesen elolvad, a pH-t 7,2...7,6-ra állítjuk, forrón szűrjük, autoklávban sterilizáljuk.
Hús-pepton zselatin (MPG): 10...20%-os zúzott zselatint adunk az MPB-hez, addig melegítjük, amíg a tömítőanyag megolvad, a pH-t 7,2...7,4-re állítjuk, felforraljuk, pamut-géz szűrőn átszűrjük, felöntjük. kémcsövekbe, és frakcionáltan sterilizáljuk Koch készülékben három napig 20 percig, vagy egyszer egy autoklávban 112 °C-on 15 percig.
Hottinger-féle húsleves: A Hottinger-féle bázikus emésztést csapvízzel 1:5 (1:8) arányban 120 mg amin-nitrogéntartalomig hígítjuk, adjunk hozzá 0,5% nátrium-kloridot, 0,1 g kálium-hidrogén-foszfátot, állítsa be a pH-t 7.4...7.6, forraljuk 15...20 percig, átszűrjük vatta- vagy papírszűrőn, edényekbe töltjük és 120 °C-on 20...30 percig sterilizáljuk.
A Hottinger-agart úgy állítják elő, hogy 2% agart adnak a Hottinger-féle húsleveshez.
A biológiai ipari vállalkozások kész táplevest és agart állítanak elő száraz por formájában.
A tápleves (g/l): spratt triptikus hidrolizátuma - 10,05, nátrium-klorid - 4,95. 15 g pormintát feloldunk 1 liter desztillált vízben, 2 percig forraljuk, papírszűrőn átszűrjük, edényekbe öntjük és autoklávban 120 ºC-on 20 percig sterilizáljuk (pH 7,3).
A tápagar tartalma (g/l): takarmányélesztő enzimes hidrolizátuma - 12,0; agar - 12,5; nátrium-klorid - 5,5. Egy 36 g tömegű pormintát feloldunk 1 liter desztillált vízben, 3 percig forraljuk, vattaszűrőn átszűrjük, és 120 °C-on 20 percig sterilizáljuk (pH 7,3).
Gazdag környezet. A kórokozó baktériumok sok fajtája nem szaporodik jól az általánosan használt táptalajokon, ezért az alapközeghez vért, vérszérumot, szénhidrátot stb. adnak.
Szérum és véragar: 5...10% steril defibrinált juh (nyúl) vért vagy vérszérumot (ló, szarvasmarha, nyúl) adunk az olvasztott és 45...50°C-ra hűtött steril tápagarhoz. A defibrinált birkák vérének kinyeréséhez steril tűvel aszeptikus körülmények között vért vesznek a nyaki vénából egy steril üvegbe (vagy lombikba) üveg (porcelán) gyöngyökkel vagy golyókkal, majd 15...20 percig forgó mozdulatokkal rázatják, hogy megakadályozzák. véralvadási. A fibrin a gyöngyökön marad.
A komponenseket összekeverjük, Petri-csészékbe, kémcsövekbe öntjük, és addig hagyjuk, amíg a táptalaj megkeményedik.
Hasonló módon készül a tejsavó és a vérleves.
A szénhidrát oldatokat (glükóz stb.) áramló gőzzel vagy szűréssel sterilizáljuk, és 0,5...1% mennyiségben a tápközeghez adjuk.
Különleges környezetek. Így nevezik azokat a táptalajokat, amelyeket számos baktérium specifikus növekedési igényeinek figyelembevételével fejlesztettek ki. Például McCoy sárgája táptalaj a tularemia kórokozójához, Terskikh táptalaj a Leptospira tenyésztéséhez stb.
McCoy táptalaj: a tiszta csirke tojásokat alkohollal kezelik, és gyorsan átengedik az égő lángján. Steriálisan kinyitjuk, a sárgáját elválasztjuk a fehérjétől. 60 rész sárgájához adjunk 40 rész fiziológiás oldatot (pH 7,0...7,2). A komponenseket összekeverjük, 4...5 ml-es kémcsövekbe öntjük és ferde helyzetben szérumalvadó készülékbe helyezzük. Sterilizáljuk az első napon 75 °C-on 1 órán át, a második napon 85 °C-on 30 percig. A sterilitás szabályozására az elkészített tápközeget 2 napig termosztátban tartjuk 37...38 °C-on.
A Terskikh táptalaj Zerensen és nyúlszérum foszfátkeverékéből áll. Zerensen keverék: A oldat: nátrium-hidrogén-foszfát - 11,876 g, desztillált víz - 1000 ml; B oldat: kálium-dihidrogén-foszfát - 9,078 g, desztillált víz - 1000 ml. 90 ml A oldathoz adjunk 10 ml B oldatot, és állítsuk be a térfogatot desztillált vízzel 1000 ml-re. Az oldatot 5 ml-es kémcsövekbe öntjük, és 1,5 atm nyomáson 20 percig sterilizáljuk. Adjunk hat-nyolc csepp steril, 56 °C-on inaktivált nyúlszérumot minden csőhöz.
Választható környezetek(latin electus – kiválasztott). Tápláló
környezetek egy bizonyos típusú mikroorganizmusok szelektív izolálására és felhalmozására többféle mikrobát tartalmazó anyagokból. A választható környezetek összetételükben rendkívül változatosak. Olyan komponenseket tartalmaznak, amelyek biztosítják a kívánt mikroorganizmus preferenciális növekedését és
(vagy) ilyen vagy olyan mértékben elnyomja a kísérő növekedését
mikroflóra. Az ilyen típusú közeg konzisztenciája szerint lehet
sűrű és folyékony. A folyékony elektív közegeket dúsító vagy akkumulációs közegeknek nevezik, ezeket az elhelyezéskor használják
A cél a kívánt mikroorganizmus mennyiségének növelése vegyes populációban.
A tej-só agar staphylococcusok szelektív tenyésztésére szolgál. 7,2...7,4 pH-jú, 5...7,5% nátrium-kloridot tartalmazó MPA megolvadásához adjunk hozzá 10% steril sovány tejet, keverjük össze és öntsük Petri-csészékbe.
A Shustova táptalaj a Salmonella izolálására szolgál. Ez egy MPA (pH 7,4), a tápközeg térfogatához 10%-os 50%-os vizes nátrium-tioszulfát-oldat és 2%-os Lugol-oldat hozzáadásával.
A Rappoport táptalaj Salmonella tenyésztésére szolgál. 1% glükózt, 10% epét, 1% Andrede indikátort adnak az MPB-hez. Áramló gőzzel sterilizálja.
A Muller-féle táptalajt Salmonella tenyésztésére szánják. 90 ml MPB-t egy lombikba öntünk 4,5 g steril krétával, autoklávban 120 °C-on 30 percig sterilizáljuk, majd sterilen hozzáadunk 2 ml Lugol-oldatot és 10 ml nátrium-tioszulfát-oldatot (50 g nátrium-tioszulfát). , desztillált víz - 100 ml) , Koch-készülékben 30 percig sterilizálva.
A Kauffman táptalaj a Salmonella dúsító tápközege. 100 ml Müller táptalajhoz adjunk 1 ml 1:1000 arányban hígított briliánzöld vizes oldatot és 5 ml steril szarvasmarha epét. A keveréket folyó gőzzel 30 percig sterilizáljuk.
A Bordetella tenyésztéséhez penicillint tartalmazó kazein faszén agart (CCA) használnak. 1000 ml desztillált vízhez adjunk hozzá 20 ml kazein-hidrolizátumot, 5 g nátrium-kloridot, 0,2 g kálium-kloridot, 0,002 g kalcium-kloridot, 0,4 g nátrium-karbonátot, 0,025 g magnézium-kloridot, 0,025 g magnézium-kloridot, 24 kálium-hidrogén-foszfátot. g, oldható keményítő - 1 g, cisztin - 0,01 g, agar - 20 g A komponenseket feloldjuk, a pH-t 7,2-re állítjuk, 0,5 atm nyomáson 30 percig sterilizáljuk. Használat előtt adjon hozzá 3% élesztőkivonatot és 0,2% száraz aktív szenet és 0,5 U/ml penicillint az olvadt agarhoz (50 °C). A komponenseket összekeverjük és Petri-csészékbe öntjük.
Differenciáldiagnosztikai környezetek. A mikroorganizmusok enzimeinek kimutatására tervezték. A konzisztencia lehet folyékony, félig folyékony, sűrű. Ezen táptalajok összetétele tartalmazza a vizsgált mikroorganizmus növekedését biztosító fő tápközeget, az enzim kimutatására szolgáló szubsztrátot és egy indikátort, amelynek színváltozása a táptalaj pH-jának eltolódását jelzi az aljzat lebomlása.
Az ilyen típusú tápközegek közé tartozik a Gissa, Endo, Ploskirev, Levin stb.
A Hiss táptalajt izolált mikroorganizmus-kultúrák enzimatikus tulajdonságainak tanulmányozására használják. 100 ml desztillált vízhez adjunk 1% peptont és 0,5 g nátrium-kloridot. A komponenseket feloldjuk, papírszűrőn átszűrjük, a pH-t 7,0...7,4-re állítjuk, hozzáadjuk az egyik szénhidrát szubsztrátot (laktóz, glükóz stb.), agar-agart (0,3...0,4 %), majd 1 ml Andrede indikátort vagy 0,1 ml 1,6%-os brómtimolkék oldatot. Az elkészített táptalajt 3 ml-es kémcsövekbe öntjük és áramló gőzzel három egymást követő napon 30 percig vagy 112 °C-on 20 percig sterilizáljuk.
Száraz Hiss tápközeget állítanak elő a BP indikátorral - vizes kék és rozolsav keveréke (a kész tápközeg félig folyékony állagú).
Sűrű differenciáldiagnosztikai közegeket használnak a kórokozók elsődleges izolálására az anyagból. Összetételükben az ismert szubsztrátumon kívül gyakran olyan anyagok is szerepelnek, amelyek szelektív tulajdonságokat kölcsönöznek a tápközegnek.
Az Endo tápközeg laktózt tartalmaz szubsztrátként, és arra készült, hogy megkülönböztesse azokat a baktériumokat, amelyek laktóz lebontó képességükben különböznek egymástól.
1000 ml olvadt MPA-hoz (pH 7,4) 70 ° C-on adjunk hozzá 1 g laktózt, amelyet előzetesen feloldunk kis mennyiségű desztillált forralt vízben. Külön kémcsövekben készítsünk: 2...3 ml bázikus fukszin alkoholos oldatát; 10 ml 10%-os vizes nátrium-szulfát oldat.
Adjon 1 ml fukszin oldatot egy steril kémcsőbe, és adjon hozzá nátrium-szulfit oldatot, amíg a fukszin elszíneződik. Az elkészített keveréket olvasztott agarba öntjük, összekeverjük és Petri-csészékbe öntjük. Az elkészített táptalaj színtelen, amikor a laktózt lebontó mikroorganizmusok szaporodnak rajta, a tápközeg megsavanyodik, az elszíneződött fukszin helyreáll, és a mikroorganizmus telepe, például az Escherichia, vörös színt kap, fémes árnyalattal. A táptalajt egy nappal a felhasználás előtt készítjük el. Endo száraz táptalajt is gyártanak. Használat előtt bizonyos mennyiségű port adunk desztillált vízhez, felforraljuk és Petri-csészékbe öntjük.
A Levin-féle tápközeg célját tekintve hasonló az Endo táptalajhoz, de más indikátort (eozint metilénkékkel) tartalmaz. 100 ml olvadt MPA-hoz (pH 7,2...7,4) adjunk 2 ml 0,5 %-os vizes metilénkék oldatot, 1,5 ml 2 %-os eozinsárga oldatot, 2 g laktózt, 0,2 g kálium-dihidrogén-foszfátot. A festékoldatokat desztillált vízben készítjük, és folyó gőzzel 60 percig sterilizáljuk. A laktózt és a kálium-dihidrofoszfátot kis mennyiségű steril desztillált vízben előhígítjuk és felforraljuk. Ezen a táptalajon a laktóz-pozitív baktériumok telepei lilás-feketék.
A Ploskirev agar a szalmonella izolálására szolgál, szubsztrátként laktózt és olyan komponenseket tartalmaz, amelyek elnyomják a kísérő mikroflóra növekedését. A táptalajt por formájában állítják elő a tápagar alapon kívül, tartalmaz: epesókat, nátrium-citrátot, nátrium-tioszulfátot, nátrium-foszfátot, briliáns zöldet, szódabikarbónát, jódot, nátrium-kloridot, laktózt, semleges vöröset. A por egy mintáját vízben feloldjuk, felforraljuk és Petri-csészékbe öntjük. Az elkészített táptalaj tiszta vagy rózsaszínű. A Salmonella telepek színtelenek, az Escherichia telepek vörösáfonya színűek.
Mikroorganizmusok tenyésztésének módszerei. Az általános elvek mellett a különféle élettani csoportokba tartozó mikroorganizmusok tenyésztésének van néhány jellemzője: Aerob és fakultatív anaerob baktériumok tenyésztése. A tiszta mikroorganizmuskultúrákkal vagy a vizsgált anyaggal beoltott szilárd, folyékony vagy félfolyékony tápközeget termosztátokba helyezzük (34. ábra), amelyek fenntartják az adott mikroorganizmus számára optimális hőmérsékletet. A normál felső határ feletti hőmérsékleten a baktériumok nemcsak lelassítják növekedésüket, hanem gyorsan el is pusztulnak. Az optimálisnál alacsonyabb hőmérsékleten a mikroorganizmus növekedési üteme fokozatosan lelassul.
Mezofileknél a hőmérséklet optimuma 30...37 ºС, pszichrofileknél - 10... 15 ºС, termofileknél - 50...60 ºС.
A táptalajokon történő tenyésztési folyamatban lévő mikroorganizmusok, feltéve, hogy a táptalajhoz nem adnak további anyagokat, fokozatosan lelassítják, majd leállítják növekedésüket a tápanyag-szubsztrát kimerülése, a biofizikai mutatók (pH, Eh, stb.). A mikroorganizmusok ilyen tenyésztését periodikusnak nevezik. Ha a folyékony táptalajt nem keverik a növények inkubálása során, akkor ez a termesztési mód helyhez kötöttnek minősül. A diagnosztikus bakteriológiai vizsgálatokhoz általában ezt a tenyésztési módszert alkalmazzák. A biológiai iparban, vakcinák és egyéb biológiai termékek előállítása során, amikor a baktériumtömeg vagy az exotoxinok maximális hozamának elérése szükséges, időszakos tenyésztést alkalmaznak folyékony tápközegben, intenzív keveréssel.
Az ilyen feladatokhoz a Schüttel készülékeken lombikban és palackokban aerob baktériumokat tenyésztenek 150...250 min-1 rezgési frekvenciával, ami megkönnyíti az oxigén és a tápanyag komponensek átvitelét a baktériumokhoz.
Rizs. 35. Aerob mikroorganizmusok mélytenyésztésére szolgáló fermentor vázlata.
1 – levegő bemenet; 2 – levegőkimenet; 3 – lökhárítók; 4 – keverő; 5 - buborékoló
A baktériumok leghatékonyabb tenyésztése folyékony tápközegben, maximális biotermék-hozam mellett fermentorokban érhető el. A fermentorok (reaktorok) 500-1000 l űrtartalmú fém- vagy üvegtenyésztőedények (35. ábra). Baktériumok fermentorokban történő tenyésztésekor a táptalajt keverjük speciális keverők, amelyek egyidejűleg biztosítják a szükséges mennyiségű steril levegőt. A fermentorokat autonóm rendszerekként tervezték, amelyek automatikusan szabályozzák a környezet hőmérsékletét és pH-ját. A fermentorok folyamatos (áramlásos) tenyésztést is végeznek, amelyben a szakaszos tenyészettől eltérően a tápközegbe automatikusan friss tápanyag-komponenseket juttatnak, olyan sebességgel, amely megegyezik a tenyésztett baktériumkultúra hasonló térfogatának eltávolításával. Az ilyen folyamatos termesztés jól szabályozott rendszerben elvileg korlátlanul folytatható.
Anaerob baktériumok tenyésztése. Az obligát anaerobok olyan baktériumok, amelyekben az energia és a konstruktív anyagcsere molekuláris oxigén nélkül megy végbe 02. Az ilyen mikroorganizmusokban a légzés folyamatában a végső akceptorok
elektronok szén-monoxid (IV), szulfátionok, fumarát stb. Ezen kívül a molekuláris oxigén káros hatással van számos anaerobra. Például a szigorú anaerobok alacsony oxigénkoncentráció mellett elpusztulnak (bakteroidok, fusobaktériumok), a mérsékelt anaerobok kevésbé érzékenyek ( C. perfringens), az aerotoleráns anaerobok normális légköri körülmények között növekedhetnek (tejsavbaktériumok). A legtöbb patogén anaerob szigorú vagy mérsékelt anaerob kategóriába sorolható. Termesztésükhöz speciális táptalajokat és gázkeverékeket használnak. Az anaerosztátokat utoljára kell feltölteni.
Az obligát anaerobok növekedésének szükséges feltétele nem annyira a molekuláris oxigén hiánya, mint a tápközeg alacsony TRC-je. Az élesen redukáló feltételeket úgy érik el, hogy redukáló (redukáló) anyagokat adnak a közeghez, és egyidejűleg eltávolítják belőlük a molekuláris oxigént. Az 1. táblázatban felsorolt kémiai vegyületeket redukáló anyagként adjuk a tápközeghez.
1. Redukáló anyagok anaerobok tenyésztéséhez
Ugyanebből a célból főtt máj-, izom-, agydarabokat, vérrögöket, csirke tojásfehérjét és rozsszemeket adnak a tápközeghez. Úgy tartják, hogy az SH-csoportokban gazdag anyagok erős redukáló hatást fejtenek ki ezekben a szövetekben.
Az anaerobiózis feltételeinek megteremtése érdekében a tápközeget a lehető legnagyobb mértékben megszabadítják az oxigéntől forralással, valamint közömbös gázok folyékony közegeken való átvezetésével vagy vazelinréteggel a tápközeg felületén, hogy megakadályozzák a légköri oxigénnel való érintkezést.
Hús-pepton májleves (MPLP) A Kitta-Tarozzi hagyományos táptalaj az anaerobok termesztésére. Alapja májvíz, amelyet kis darab marhamáj vízben való forralásával készítenek (1:1 arányban). A májvizet MPB-vel 1:2 arányban összekeverjük, a keveréket felforraljuk, beállítjuk a kívánt pH-t és 10 ml-es kémcsövekbe öntjük. A kémcsövekbe főtt májdarabokat (redukálószert) adunk, majd 2 ml vazelinolajat adunk hozzá. Autoklávozzuk 0,5 atm nyomáson 20 percig. Használat előtt a táptalajt tartalmazó kémcsöveket vízfürdőben felforraljuk, majd lehűtjük és csak ezután oltjuk be.
Az anaerobok termesztésére nagy viszkozitású tápközeget is használnak, mivel az oxigén diffúziója nehéz bennük.
Félfolyékony agar: adjunk hozzá 0,25...0,75% agart és 1% glükózt az MPB-hez, állítsa be a pH-t 7,4-re, öntse kémcsövekbe egy magas oszlopon és frakcionált sterilizálja.
Gyakorolják az anaerobok tenyésztését sűrű közegben.
Cukor-agar Veyon-csövekben: adjon hozzá 1% glükózt 2% MPA-hoz, állítsa a pH-t 7,4-re. A maganyagot a megolvasztott és 48...50 "C-ra hűtött tápközeghez adjuk, összekeverjük és steril keskeny üvegcsövekbe - Veyon csövekbe (hossz 20...25 cm, átmérő 1...1,5 cm) öntjük. a csövek steril gumidugóval lezárt végei A tápközeg vastagságában anaerob telepek nőnek.
Széles körben alkalmazzák az anaerobok tenyésztését szilárd táptalaj felületén Petri-csészékben.
Az anaerobok tenyésztésére szolgáló szilárd táptalajok közül gyakran használják a glükózos vér-agart és a vas-szulfit-agart.
Glükóz-vér agar: 3% MPA-ra (pH 7,2...7,4), megolvasztjuk és 50 °C-ra hűtjük, hozzáadunk 1...2% steril glükóz oldatot, 15...20% defibrint - birkavér fürdő és Petri-csészékbe öntjük.
Vas-szulfit agar (Wilson-Blair táptalaj): 100 ml 3%-os MPA-hoz (pH 7,4) 1%-os glükózzal 60 °C-on adjunk hozzá 10 ml 20%-os nátrium-szulfit-oldatot és 1 ml 8%-os vas-klorid-oldatot. , majd a táptalajt Petri-csészékbe öntjük. Az anaerobok, amikor ezen a táptalajon nőnek, a nátrium-szulfitot nátrium-szulfáttá redukálják, amely reakcióba lép a vas-kloriddal, és fekete vas-szulfit csapadékot képez; a baktériumkolóniák fekete színűek.
Ahhoz, hogy anaerobokat szilárd táptalajok felszínén tenyésztsünk, nem elég redukálószereket hozzáadni hozzájuk. A terményeket tartalmazó tenyészedényeket lezárt kamrákba (anaerosztátokba) helyezik, amelyekben így vagy úgy anaerob (oxigénmentes) körülmények jönnek létre.
A hagyományos anaerosztát egy fémhenger, amelyet hermetikusan lezárnak gumitömítéssel ellátott fedéllel (36. ábra). A fedél nyomásmérőt és csapokat tartalmaz a levegő kiszivattyúzásához vagy az anaerosztát inert gázzal (nitrogénnel) való feltöltéséhez. A levegőt vákuumszivattyúval kiszivattyúzzák, a szelepet meghúzzák, és az anaerosztátot kémcsövekkel vagy csészékkel termosztátba helyezik. A szokásos maradék nyomás az anaerosztátban körülbelül 10 Hgmm. Művészet. Létrehozták az anaerosztátokat, amelyekből az oxigén eltávolítása a bejutó hidrogénnel való reakciója miatt következik be
katalizátor (platina, palládium) jelenléte. A hidrogént egy hengerből egy reduktoron keresztül pumpálják a kamrába. Néhány anaerob kamra fűtőelemekkel van felszerelve hőmérséklet-szabályozó eszközzel, amely biztosítja az autonóm hőmérséklet-tartást a kívánt szinten.
Mikroaerofil baktériumok tenyésztése. Bár a mikroaerofil baktériumok a légzés típusa szerint aerobok, nem normál légkörben (21% oxigén), hanem csökkentett oxigéntartalom mellett szaporodnak. Például, Campylobacter magzat 6%-nál nem több oxigént tartalmazó légkörben nő. Ilyen légkör létrehozható zárt termosztátokban, anaerosztátokban, a levegő egy részét hengerből sűrített szén-monoxiddal (IV) helyettesítve, vagy hagyományos exszikkátorban. Ez utóbbi esetben a kémcsöveket a terményekkel exszikkátorba helyezzük alkohollal megnedvesített vattát tartalmazó palackkal vagy gyertyával együtt. A vattát (gyertyát) meggyújtják és az exszikkátor fedelét lecsukják. A láng az oxigén kiégésével kialszik, tartalmának csökkenése elegendő a mikroaerofilek növekedéséhez.
A mikroaerofilek tenyésztésének legelérhetőbb és leghatékonyabb módja a 0,1...0,4% agart tartalmazó félfolyékony táptalaj. Ilyen környezetben a konvekciós áramok nem képesek összekeverni a közeg felső, oxigénben gazdag rétegeit az alsókkal, ami oxigénkoncentráció gradienst hoz létre a kémcsövet kitöltő közegben. A mikroaerofil tenyészetet szúróval oltják be, és a mikroorganizmus egy optimális oxigéntartalmú zónában növekszik, általában vékony korongok formájában, a táptalaj felületétől néhány millimétertől több tíz milliméterig.
Gombatermesztés. A gombák legjobb növekedése 1...4%-os szénhidráttartalmú táptalajokon volt megfigyelhető. Az elsődleges izolálás során gyakran adnak antibiotikumokat a táptalajhoz, hogy elnyomják a különféle kapcsolódó baktériumok növekedését.
A Sabouraud agart dermatomycosis és candidiasis kórokozóinak tenyésztésére használják. Glükóz - 4 g, pepton - 1 g, agar - 1,8 g, desztillált víz - 100 ml. Az agar feloldása után a táptalajt leszűrjük, kémcsövekbe öntjük és 0,5 atm nyomáson 30 percig sterilizáljuk. Sterilizálás után a tápközeg pH-ja 6,9...7,0.
A Capek agart sokféle gomba termesztésére használják. Glükóz - 30 g, nátrium-nitrát - 2 g, kálium-dihidrogén-foszfát - 1, magnézium-szulfát - 0,5 g, kálium-klorid - 0,5 g, vas-szulfát - 0,0012 g, agar - 20 g, desztillált víz - 1000 ml. A környezet természetes pH-ja 5,6...5,9. A táptalajt 0,5 atm nyomáson 30 percig sterilizáljuk.
A wort agar a dermatomycosis és a candidiasis kórokozóinak tenyésztésére szolgál. A nem komlózott malátacefrét csapvízzel 1:2 arányban hígítjuk (7%-os cukortartalomig), pH-ját 6,5...6,7-re állítjuk, 2%-os agart adunk hozzá, felforraljuk, szűrjük, 0,5 atm-en sterilizáljuk. 30 perc. .
A Litman-agar dermatofiták tenyésztésére alkalmas. Pepton - 10 g, glükóz - 10 g, ökörepe - 15 g, kristályibolya - 0,01 g, agar - 20 g, desztillált víz - 1000 ml. A táptalajt 1 atm nyomáson 15 percig sterilizáljuk.
A Van Iterson táptalaj olyan mérgező gombák takarmányból történő izolálására szolgál, amelyek stachybotryotoxicosis, dendrodochiotoxicosis stb. A táptalajt 1 atm 30 mc nyomáson sterilizáljuk. Ezután a szűrőpapírral ellátott steril Petri-csészéket megnedvesítjük a tápközeggel.
Czapek-féle folyékony közeg. Glükóz - 30 g, nátrium-nitrát - 2 g, kálium-dihidrogén-foszfát - 1 g, magnézium-szulfát - 0,5 g, kálium-klorid - 0,5 g, vas-szulfát - 0,001 g, desztillált víz - 1000 ml. A táptalajt 0,5 atm nyomáson 30 percig sterilizáljuk. Sterilizálás után a környezet pH-ja 5,9...6,2. A folyékony táptalaj felhasználható szűrőpapír nedvesítésére Petri-csészékben a későbbi gombatermesztéshez.
A Bilay táptalaj gombák makrokonídiumainak kinyerésére szolgál. Kálium-nitrát - 2 g, kálium-dihidrogén-foszfát - 1 g, magnézium-szulfát - 0,5 g, kálium-klorid - 0,5 g, vas-szulfát - nyomokban, oldható keményítő - 0,1 g, szacharóz - 0,1 g, glükóz - 0,1 g, 1000 desztillált víz ml. A táptalajt 5 ml-es kémcsövekbe öntjük, és mindegyik kémcsőbe egy szűrőpapírcsíkot helyezünk úgy, hogy annak nagy része az oldat felett legyen. A táptalajt 1 atm nyomáson 20 percig sterilizáljuk.
A Sabouraud glükózlevest sokféle gomba termesztésére használják. Glükóz - 40 g, pepton - Dél, desztillált víz - 1000 ml. Forraljuk fel, öntsük kémcsövekbe és sterilizáljuk 1 atm nyomáson 15 percig.
A Van Breusegem szerinti szőrtenyésztést a dermatofiták izolálására használják. Az egészséges, steril hajat kollódiummal rögzítik egy üvegcsőhöz. A haj közepére gombakultúrát alkalmaznak. A csövet egy hengerbe helyezzük, amelynek aljára kis mennyiségű vizet öntünk a páratartalom érdekében. Tenyésztsük 25°C-on 5-10 napig vagy tovább.
A vér agart a hisztoplazmózis és a járványos limfangitisz kórokozóinak izolálására használják.
FELADATOK ÖNÁLLÓ MUNKÁHOZ
1. Készítsen MPA ferde, szérumot és vért
MPA.
2. Tanulmányozza az anaerosztát és fermentor szerkezetét!
Ellenőrző kérdések
1.Milyen általános követelmények vonatkoznak a táptalajokra?
2.Milyen csoportokba sorolhatók a tápközegek?
Hogyan termesztik az anaerobokat és a mikroaerofileket?
A tápközegek a bakteriológiai kutatások alapját képezik. Arra szolgálnak, hogy a vizsgált anyagból tiszta mikrobatenyészeteket izoláljanak és tulajdonságaikat tanulmányozzák. A tápközeg optimális feltételeket teremt a mikroorganizmusok elszaporodásához. A tápközegnek tartalmaznia kell a citoplazma összes komponensének felépítéséhez szükséges anyagokat, pl. az élő szervezet növekedésének minden forrása. Ezek elsősorban nitrogén-, szén-, hidrogén- és oxigénforrások.
A tápközegben lévő hidrogén és oxigén forrása a víz. A nitrogén forrása a húsból, halból, méhlepényből, tejből, tojásból és vérből nyert szerves vegyületek. A pankreatinnal vagy tripszinnel végzett hidrolízis eredményeként ezek a termékek az ún. nagy mennyiségű aminosavat és peptont tartalmazó hidrolizátumok, amelyeket a legtöbb mikroorganizmus jól felszív. A natív fehérjét csak néhány olyan mikroorganizmus emészti meg, amelyek exoproteázokkal rendelkeznek. A hidrolizátumok számos mikroorganizmus táptalaj készítésének alapját képezik.
A kórokozó mikrobák szénforrása elsősorban különféle szénhidrátok: mono- és diszacharidok, többértékű alkoholok, szerves savak és sóik.
A baktériumok az organogének mellett foszfort, káliumot, ként, nátriumot, magnéziumot, vasat tartalmazó szervetlen vegyületeket, valamint mikroelemeket is igényelnek: kobalt, jód, mangán, bór, cink, molibdén, réz stb.
A mikroorganizmusok szervetlen vegyületek iránti igényét a tápközeghez KH2PO4 K2HPO4 sók hozzáadásával elégítik ki A kémiai folyamatok katalizátoraként működő mikroelemek elhanyagolható mennyiségben kerülnek a tápközegbe peptonnal, szervetlen sókkal és vízzel. A felsorolt szerves elemek mellett sok mikroorganizmusnak szüksége van növekedési faktorokra, pl. olyan anyagokban, amelyeket ők maguk nem tudnak szintetizálni. Növekedési faktorokat a táptalajokhoz kész formában kell hozzáadni. A növekedési faktorok közé tartoznak a különféle vitaminok, amelyek forrása a tápközegben a tápközeghez adott növényi és állati eredetű termékek, amelyek nikotin-, pantotén-, parabenzoesavat, A-, B-, C-vitamint stb.
A tápanyagokat a mikrobák csak bizonyos környezeti reakció hatására tudnak felvenni, mert a mikrobiális sejtmembránok permeabilitása a környezet pH-jától függően változik.
A tápközegekre vonatkozó követelmények.
1. A táptalajnak tartalmaznia kell a mikrobák táplálásához szükséges tápanyagokat.
2. Olyan pH-reakció legyen, amely optimális a termesztett mikroba típusához. -
3. A tápközegnek megfelelő nedvességtartalmú és viszkozitásúnak kell lennie, mert a mikrobák a diffúzió és az ozmózis törvényei szerint táplálkoznak.
4. Legyen izotóniás és rendelkezzen bizonyos redoxpotenciállal (rH2).
5. A táptalajnak sterilnek kell lennie, biztosítva ezzel a tiszta kultúrák termesztésének lehetőségét.
A különböző típusú mikrobák tápanyagigénye és fizikai feltételei nem azonosak, és ez kizárja az univerzális táptalaj létrehozásának lehetőségét.
A konzisztencia alapján szilárd és folyékony tápközegek vannak. A sűrűeket folyékony alapon készítjük el ragasztóanyag hozzáadásával: agar-agar vagy zselatin! Az agar-agar (malájul zselé) tengeri moszatból kivont növényi eredetű termék. Az agar-agar 80-86°C-os vízben oldódik, 36-40°C-on megkeményedik, ezért tápközegek tömörítésére használják különböző mikroorganizmuscsoportok optimális hőmérsékleten történő termesztésére.
A tápközegeket összetételük és rendeltetésük szerint osztályozzák.
1.Az összetétel alapján a tápközegeket egyszerű és összetett csoportokra osztják
Van egy csoport általános célú környezet – egyszerű. Ebbe a csoportba tartozik a hús-pepton húsleves (egyszerű tápleves), a hús-pepton agar (egyszerű tápanyag-agar), a tápláló zselatin. Ezeket a táptalajokat számos patogén mikroba szaporítására használják. Az általános célú tápközeget vagy egyszerű táptalajt általában hidrolizátumokból állítják elő pepton és nátrium-klorid hozzáadásával. Komplex hordozók készítésének alapjául is szolgálnak.
2. A második csoportba tartoznak a választható, speciális és differenciáldiagnosztikai környezetek.
Választható környezetek (szelektív, szelektív, felhalmozás, gazdagítás). A szelektív táptalaj létrehozásának elve a tenyésztésre szánt mikrobatípus alapvető biokémiai és energiaszükségletének kielégítésén, vagy a kísérő mikroflóra növekedését visszaszorító inhibitorok hozzáadásán alapul. A tápanyagok, mikroelemek, növekedési faktorok meghatározott összetétele és koncentrációja szigorúan meghatározott pH-érték mellett, vagy inhibitorok hozzáadása optimális feltételeket biztosít egy vagy több típusú mikroorganizmus tenyésztéséhez. Ha különféle mikrobák keverékét tartalmazó anyagot vetünk rájuk, annak a fajnak a növekedése fog először hervadni, amelyre a környezet szelektív lesz. Választható táptalajok például a tojássárgája, szelenitleves, Ploskirev táptalaj - a bélcsaládba tartozó mikrobák tenyésztésére, lúgos peptonvíz - a Vibrio cholerae számára.
Sárgás húsleves. Az MPB-hez 10-20% ökörepét adnak. Az epe elnyomja a coccusok és a légi flóra növekedését, de kedvez a szalmonella elszaporodásának.
Szelenites húsleves. Foszfátlevesből áll, szelenit nátriumsó hozzáadásával, amely gátolja a coccal flóra és az Escherichia coli növekedését, de nem gátolja a szalmonella növekedését.
Szerda Ploskireva. Sűrű, E. coli, coli inhibitorokat tartalmazó táptalaj, de kedvező a Shigella és Salmonella szaporodásához, melyek szaporodását nem gátolják a briliánzöld és az epesók.
Pepton víz. 1% peptont és 0,5% nátrium-kloridot tartalmaz. A környezet szelektív a klórvibriókra, mert jobban szaporodnak, mint más baktériumok „éhes környezetben”, főleg lúgos reakcióval, mert maguk is savas salakanyagokat választanak ki.
Különleges környezetek. Olyan baktériumok tenyésztéséhez szükséges, amelyek nem szaporodnak egyszerű táptalajokon. Egyes organizmusok esetében szénhidrátot, vért és egyéb kiegészítő tápanyagokat kell hozzáadni az egyszerű táptalajokhoz. Az egyszerű tápközegek példái a streptococcushoz használt cukorleves és cukoragar (MPB-ből, illetve MPA-ból készül, amelyhez 0,5-2% glükózt adnak).
A pneumococcusok és a meningococcusok esetében a speciális táptalaj a tejsavóleves és a tejsavó-agar (tejsavóleves készítéséhez 1 rész MPB-t 2 rész friss szérummal összekeverünk; tejsavó-agar előállításához 10-25% steril ló- vagy szarvasmarha-szérumot adunk az olvadékhoz MPA).
Differenciáldiagnosztikai táptalajokat használnak a vizsgált mikroba fajának meghatározására az anyagcsere jellemzői alapján.” Céljuk szerint a differenciáldiagnosztikai környezetek a következőképpen oszlanak meg:
1. Mikrobák proteolitikus képességének azonosítására szolgáló táptalajok, amelyek tejet, zselatint, vért stb.
2. Szénhidrátot és többértékű alkoholokat tartalmazó közegek
különböző szacharolitikus enzimek kimutatása.
A szacharolitikus tulajdonságok és a redox enzimek azonosítására tervezett differenciáldiagnosztikai közegek összetételéhez indikátorokat adnak: semleges vörös, savas fukszin, brómtimolkék, vizes kék rózsaszín savval (BP). Különböző pH-értékeknél színének megváltoztatásával az indikátor egy enzim jelenlétét és a táptalajba juttatott összetevő lebomlását jelzi.
Példák differenciáldiagnosztikai környezetekre:
Endo környezet. 1% laktóz hozzáadásával MPA-t és nátrium-szulfittal színtelenített bázikus fukszint (indikátor) tartalmaz. Az Endo medium enyhén rózsaszín színű. A bélfertőzések diagnosztizálására használják, hogy megkülönböztessék azokat a baktériumokat, amelyek a laktózt lebontva savas termékeket képeznek azokból a baktériumokból, amelyek nem rendelkeznek ezzel a képességgel. A laktóz-pozitív mikrobák (Escherichia coli) telepei vörösek a fukszin redukciója miatt. A laktóznegatív mikroorganizmusok - szalmonella, shigella stb. - telepei színtelenek.
A differenciáldiagnosztikai környezetek közé tartozik egy rövid és egy kiterjesztett tarka sorozat. Szénhidrátot (Hiss táptalajt), MPB-t, tejet és hús-pepton zselatint tartalmazó táptalajból áll.
A hiszti táptalajt pepton víz alapján készítik, amelyhez kémiailag tiszta mono-, di- vagy poliszacharidokat (glükóz, laktóz, keményítő stb.) adnak.
A savak képződése és a szénhidrátok bomlása következtében bekövetkező pH-eltolódások kimutatására indikátort adnak a tápközeghez. A szénhidrátok mélyebb lebontásával gáznemű termékek (CO2, CH4 stb.) keletkeznek, amelyeket úszókkal - kis kémcsövekkel - fejjel lefelé a tápközegbe lefognak. A szénhidrátot tartalmazó táptalajok sűrűek is elkészíthetők - 0,5-1% agar-agar hozzáadásával. Ezután a gázképződést a közeg oszlopában buborékok (törések) képződésével érzékeljük.
A motley sorozatba tartozó MPB-n aminosavak és peptonok (indol, kénhidrogén) lebomlása során keletkező termékek találhatók. A hidrogén-szulfid kimutatása úgy történik, hogy a tenyészet elvetése után ólom-acetát oldattal átitatott szűrőpapírcsíkot helyezünk az MPB-be. A kéntartalmú aminosavak lebontásakor kénhidrogén szabadul fel, és a papír az ólom-szulfid képződése miatt elfeketedik. Az indol meghatározására komplex indikátor használható. Az indol a triptofán lebomlásával képződik, és akkor mutatható ki, ha ezt az indikátort MPB-n termesztett tenyészethez adjuk. Indol jelenlétében az MPB zöldre vagy kékre változik.
Száraz környezet.
A táp-agart, valamint a fő differenciáldiagnosztikai táptalajokat jelenleg száraz készítmények formájában állítják elő, amelyek minden szükséges komponenst tartalmaznak. Az ilyen porokhoz csak vizet kell adni és felforralni, majd kiöntés után sterilizálni kell.
A táptalajok osztályozása:
Természetes– állati vagy növényi eredetű termékekből állnak, és bizonytalan kémiai összetételűek. Például: zöldség- és gyümölcslevek, állati szövetek, vér, tej, tojás stb. (IPA, MPB).
Félszintetikus– az összetétel ismert kémiai természetű vegyületeket és ismeretlen összetételű anyagokat tartalmaz. Például: MPB glükózzal, Endo közeg, Sabouraud táptalaj.
Szintetikus– csak kémiailag tiszta vegyületeket tartalmaznak pontos koncentrációban. Laboratóriumi kísérletekben használják. Például: Chapek, Omelyansky, Ushinsky stb. környezete.
A táptalaj célja
Egyetemes(általános célú) - sokféle mikroorganizmus termesztésére alkalmas, és speciális tápközegek alapjául szolgál. Példák: MPB, MPA, Hottinger táptalaj, GRM, tioglikolát táptalaj.
Különleges olyan esetekben használják, amikor a mikroorganizmusok nem szaporodnak egyszerű táptalajon. Ide tartozik a vér, a szérumagar, a tejsavóleves, az ascites húsleves, az ascites agar és mások.
1. Választható környezetek- egyes mikroorganizmusok gyorsabban és intenzívebben szaporodnak rajtuk, mint más típusú baktériumok. Például az 1%-os lúgos pepton víz a vibrios cholera, a Roux és Leffler táptalaj a diftéria kórokozók számára választható táptalaj.
2. Szelektív - szelektív adalékanyagoknak (epe, festékek, antibiotikumok stb.) köszönhetően bizonyos típusú mikroorganizmusok kifejlődését képesek elnyomni, más típusokat azonban nem befolyásolnak. Példák: A Müller táptalaj szelektív a tífusz-paratífusz baktériumokra, a furazolidon-tween agar szelektív a corynebaktériumokra és a mikrokokkuszokra. Az antibiotikumok hozzáadása a táptalajhoz szelektívvé teszi azokat a gombákkal szemben (pl. Sabouraud táptalaj stb.).
3. Differenciáldiagnosztika- olyan közegcsoport, amely lehetővé teszi a mikroorganizmusok biokémiai tulajdonságainak meghatározását és megkülönböztetését. A proteolitikus, peptolitikus, szacharolitikus, hemolitikus, lipolitikus és redukáló tulajdonságok meghatározására szolgáló táptalajokra oszthatók (Endo, Levin, Ploskirev, Gissa táptalajok).
4. Tartósítószer (szállítás) -
célja, hogy a mikroorganizmusok életképességét a begyűjtés pillanatától megőrizze
bioanyag a tenyésztés előtt a diagnosztikához
Folyékony(levesek) – a mikroorganizmusok biomassza fiziológiai és biokémiai jellemzőinek és felhalmozódásának vizsgálata
Félig folyékony(1% agar) – tenyészetek tárolása és anaerobok tenyésztése
Sűrű(3-5% agar) – tiszta kultúrák izolálása, akkumuláció, mennyiségi rögzítés, kulturális tulajdonságok vizsgálata, antagonisztikus kapcsolatok
Tömeges– vetőmag ipari tárolása (köles, korpa)
Száraz– az ipar által előállított táptalaj készítésére
Közlekedési rendszer Stuart környezettel
A Stewart-féle táptalaj egy félszilárd, tápanyagban szegény szubsztrát a kórokozó mikroorganizmusok széles körének konzerválására és szállítására, mint pl. Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp. stb. A legigényesebb mikroorganizmusok több mint egy napig, mások akár több napig is túlélnek ebben a környezetben.
A tioglikolát jelenléte a tápközegben elnyomja a baktériumok enzimaktivitását, a nitrogén hiánya pedig megakadályozza szaporodásukat.
Közlekedési rendszer Keri Blair környezettel
A Keri Blair-féle szállítóközeg a Stewart alapvető szállítóközegének módosítása, amelyet kifejezetten székletmintákhoz terveztek.
Glicerofoszfát, amely egyes enterobaktériumok metabolitja ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, stb.), szervetlen foszfáttal helyettesítve,
A metilénkéket eltávolítjuk, és a tápközeg pH-ját 8,4-re emeljük.
A Keri Blair táptalaj lehetővé teszi a legtöbb kórokozó megőrzését, beleértve az igényes mikroorganizmusokat, mint pl Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp..
Ez a közeg szabványos az anaerobok szállítására.
Közlekedési rendszer Ames környezettel
Az Ames szállítóközeg az alapvető Stewart-transzportközeg egy másik módosítása, amelyben a glicerofoszfátot szervetlen foszfát váltja fel, mivel a glicerofoszfát egyes enterobaktériumok metabolitja. Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae stb.) és támogathatja egyes Gram-negatív mikroorganizmusok növekedését.
A metilénkéket gyógyszerészeti minőségű aktív szénre cserélték.
Kalciumot és magnéziumot adtunk a táptalajhoz, hogy fenntartsuk a baktériumsejtek permeabilitását.
Ez a környezet képes támogatni a mikroorganizmusokat, mint pl Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococcusok, Enterobacteriaceae stb., azonban a legjobb eredményt az első 24 órán belüli termesztés éri el.
Univerzális dúsító közeg: húspepton agar (MPA) és húspeptonleves (MPB)
Ezek a fő táptalajok a mikroorganizmusok beoltásához, hogy ellenőrizzék a tenyészetek tisztaságát a biokémiai és szerotipizálás előtt.
Az igénytelen mikroorganizmusok tenyésztésére és számlálására használják. A táptalaj félfolyékony formában kontroll (referencia) mikroorganizmusok tárolására használható.
Univerzális tárolási környezetek Hottinger környezet
Különféle mikroorganizmusok, például enterobaktériumok, Pseudomonas aeruginosa, staphylococcusok és bizonyos típusú streptococcusok tenyésztésére tervezték. Szükség esetén szénhidráttal, sókkal dúsítható.
Hottinger-hidrolizátumot tartalmaz, amelyet darált hús (marhahús) pankreatinnal történő enzimatikus hidrolízisével, majd szűréssel és tartósítószerként kloroform hozzáadásával nyernek.
Univerzális tárolási környezetek:Mueller-Hinton környezet
Ezt a táptalajt termesztésre használják Neisseria sp. valamint a mikroorganizmusok antimikrobiális szerekkel szembeni érzékenységének meghatározása.
Szerda McConkey
Az enterobaktériumok és a rokon Gram-negatív bacillusok szelektív izolálására a MacConkey táptalajok javasoltak differenciál táptalajként.
A laktóz-pozitív törzsek rózsaszín vagy vörös telepekkel nőnek, amelyeket epesó kicsapódási zóna vesz körül.
A vörös szín a közegnek a laktóz bomlástermékei általi megsavanyodása (ha a pH 6,8 alá csökken) és a semleges vörös adszorpciója eredményeként jelenik meg.
A laktózt nem erjesztő törzsek (Shigella, Salmonella) általában átlátszó, színtelen telepeket képeznek, és nem változtatják meg a környezetet.
Differenciáldiagnosztikai környezetek:Endo környezet
Ezt a táptalajt az Endo fejlesztette ki táptalajként a laktózt fermentáló és nem fermentáló mikroorganizmusok megkülönböztetésére. Víz, szennyvíz, tejtermékek és egyéb élelmiszerek mikrobiológiai vizsgálatára szolgál.
A nátrium-szulfit és a bázikus fukszin gátló hatással van a gram-pozitív mikroorganizmusokra. A laktózt a mikroorganizmusok aldehidre és savra bontják. Az aldehid pedig fukszint szabadít fel a fukszin-szulfit komplexből, fokozva a telepek vörös színét. Az E. coliban ez a reakció nagyon kifejezett, és a fukszin kristályosodásával jár együtt, ami a telepek zöldes fémes fényében (muchsin fényességében) nyilvánul meg.
Differenciáldiagnosztikai környezetek:Sárgája sós agar
Ezt a táptalajt szelektív táptalajként használják klinikailag jelentős staphylococcus tenyészetek izolálására.
A mannit fermentálható és differenciálódó szubsztrát, valamint szénforrás.
Tojássárgája emulzió hozzáadása (legfeljebb 5 térfogatszázalék) lehetővé teszi a mikroorganizmusok lipáz aktivitásának meghatározását. Az emulzió sós környezetben átlátszóvá válik, ezért lipázaktivitás jelenlétében sárga, átlátszatlan zóna képződik a telepek körül.
Differenciáldiagnosztikai környezetek:Wilson-Blair vagy bizmut-szulfit agar
Szelektív táptalaj a szalmonella izolálására.
Az állati szövetek peptikus emésztése és a húskivonat nitrogéntartalmú tápanyagok, szén, kén, B-vitaminok és ezeknek a baktériumoknak a szaporodásához szükséges nyomelemek forrásaként szolgál.
A briliáns zöld gátolja az összes gram-pozitív baktérium növekedését. A glükóz egy fermentálható szénhidrát. A vas-szulfát képes kimutatni a hidrogén-szulfid képződését.
A bizmut egy nehézfém, amely a Salmonella kivételével gátolja a legtöbb Gram-negatív bélbaktérium növekedését.
A szalmonellák a vas-szulfátot glükóz és bizmut-szulfit jelenlétében vas-szulfiddá redukálják, ami a kolóniáikat feketévé változtatja.
Speciális választható környezetek:Loeffler környezete
Ezt a táptalajt lószérum hozzáadásával használják a tenyésztéshez Corynebacterium diphtheriae klinikai anyagból és e mikroorganizmusok tiszta kultúráinak szubkultúráiból.
A magas szérumkoncentráció segít meghatározni a mikroorganizmusok proteolitikus aktivitását, valamint a pigmentképződést. A pepton és a húskivonat alapvető tápanyagokkal látják el a mikroorganizmusokat. A glükóz fermentálható szubsztrát és energiaforrás.
Speciális szelektív közeg:Kampilobakagar
Szelektív táptalaj a Campylobacter számára, amely birka- vagy lóvért tartalmazó véragar alapból és antibiotikumokból állt.
Az antimikrobiális komponensek jelentősen gátolják a normál mikroflóra növekedését, elősegítik a növekedést és a székletből való kiválasztódást Campylobacter fetus ssp. jejuni.
Az amfotericin B jelenléte a kiegészítőben jelentősen vagy teljesen elnyomja a gombák szaporodását a később bevitt cefalotin fokozza a normál bélmikroflóra elnyomását.
Kolóniák Campylobacter fetus ssp. jejuni nyálkás karakterűek, laposszürke, szabálytalan körvonalúak vagy emelkedettek, kerekek, hemolízis nélkül.
Egyes törzsek sárgásbarna vagy rózsaszínes telepeket hozhatnak létre.
A táptalaj nedves felületén összeolvadó növekedés vagy rajzás fordulhat elő.
A választható tápközeget S.N. Vinogradsky és M. Beyerinck vezette be a mikrobiológiai gyakorlatba. Ezek olyan tápközegek, amelyekben egy vagy több kémiai vegyület hozzáadásával optimális feltételeket teremtenek egy mikroorganizmustípus (vagy rokon mikroorganizmusok csoportja) növekedéséhez és szaporodásához, és kedvezőtlen feltételeket teremtenek az összes többi számára. Az ilyen táptalajokat főként a mikroorganizmusok tiszta kultúrájának természetes élőhelyükről történő izolálására és kultúrák tömegének felhalmozására használják (kémiai módszer a tiszta kultúra izolálására). Például a táptalaj, amely a koagulált lószérum, szelektív táptalaj a diftéria baktériumok számára, lúgos peptonvíz a Vibrio cholera, az epeleves a tífusz kórokozója számára, a májleves a Brucella stb.
A mikrobák szelektív tápközegben történő felhalmozódása sok esetben fontos előlépésként szolgál a tiszta tenyészetek eredeti vizsgálati anyagokból (például Vibrio cholerae vagy tífuszbaktériumok a betegek ürülékéből vagy a hordozókból stb.) történő elkülönítésében.
Mit értesz differenciált tápközeg alatt?
A differenciáldiagnosztikai közegek azok a közegek, amelyek a mikroorganizmusok növekedését és fejlődését biztosító anyagokon kívül bizonyos enzimek szubsztrátjaként használt anyagokat is tartalmaznak. A szubsztrát minőségi változása alapján meghatározzák egy adott enzim jelenlétét (egy olyan indikátor segítségével értékelik, amely reagál a tápközegben lévő szubsztrát bomlástermékek jelenlétére).
A mikroorganizmusok mindegyik típusát egy meglehetősen stabil enzimkészlet jellemzi. Az enzimkészlet differenciáldiagnosztikai közegekkel történő meghatározása lehetővé teszi a mikroorganizmusok típusainak megkülönböztetését. Például a véragar lehetővé teszi a hemolizin enzim kimutatását, a His media - szacharolitikus enzimek (szénhidrázok), a zselatint a mikrobák proteolitikus tulajdonságainak figyelembevételére használják stb.
Véragar. A hemolizin enzim jelenlétét a vörösvértestek pusztulása és a vér agaron tenyésztett mikrobák körüli világos zóna kialakulása alapján ítélik meg.
A médiája. A szénhidrátokat savvá bontó enzimek - szénhidrázok jelenlétét a tápközeg pH-értékének savas oldal felé történő változása és a tápközeg színének megváltozása jelzi. Az enzimkészlet különbsége felhasználható az izolált tenyészet tisztaságának ellenőrzésére, valamint az egyik faj gyors megkülönböztetésére a fertőző anyag beoltásának kezdeti vizsgálata során.
Kémiai reagensek
1. Mik azok a kémiai reagensek és mire használják őket?
Kémiai reagensek- a laboratóriumi gyakorlatban különféle kémiai reakciók végrehajtására használt anyagok.
A legtöbb esetben a kémiai reagensek egyedi anyagok, de gyakran összetett összetételűek. A kémiai reagenseknek nincs általánosan elfogadott osztályozása, leggyakrabban analitikai kémiai reagensekre és minden másra osztják őket.
2. Az állatgyógyászatban milyen célokra használják?
Az állatgyógyászatban a kémiai reagenseket analitikai és diagnosztikai célokra használják klinikai, állategészségügyi, higiéniai, szakértői, biokémiai és egyéb laboratóriumi vizsgálatokban. A biológiai és klinikai gyakorlatban alkalmazott és kifejlesztett kutatási módszerek sokféle kémiai reagenst igényelnek, amelyeknek sokféle követelménynek kell megfelelniük. Például a klinikai és biokémiai vizsgálatokhoz nagy tisztaságú enzimek szubsztrátjai, maguk az enzimek, meghatározott csoportok (SH, NH3, COOH csoportok stb.) reagensei stb. Szervetlen és szerves szintézisek, valamint kvalitatív és kvantitatív elemzések elvégzésére, pl. a különböző iparágakban végzett állat-egészségügyi ellenőrzés során, a gyógyszerek elemzése során, élelmiszeripari termékek, levegő, víz stb. állat-egészségügyi, egészségügyi és higiéniai elemzése során nagyszámú, sokféle nagy tisztaságú kémiai reagenst használnak.