Mis on valikkultuuri kandjad? Toitekeskkondade klassifikatsioon ja nende valmistamise meetodid Valiktoitekeskkond kasutusnäidete eesmärk.
Toitekeskkonna ja eriti tiheda söötme väljatöötamine erinevat tüüpi mikroorganismide jaoks on võimaldanud uurida nende kultuurilisi, biokeemilisi, antigeenseid ja virulentseid omadusi.
Pasteur kasutas mikroobide kasvatamiseks vedelaid leotisi. Esimesed tahke toitainekeskkonna arendajad olid Koch ja tema õpilased. Nad olid esimesed, kes kasutasid kartulit, kalgendatud vadakut, želatiini ja lihaekstrakti agarit.
Tahke sööde võimaldas saada mikroobide puhaskultuure ja uurida nende omadusi.
On saanud võimalikuks paljude nakkushaiguste etioloogiliste tegurite kindlaksmääramine ning ennetavate ja terapeutiliste ravimite väljatöötamine.
Mikroobide kasvatamine tahkel toitesöötmel laboritingimustes võimaldas puhaste kultuuride saamisega mitte ainult töötada vaktsiinide ja diagnostika kallal, vaid uurida ka ravieesmärkidel kasutatavate kemoterapeutiliste ravimite ja antibiootikumide toimespektrit. samuti ennetuslikel eesmärkidel kasutatavate keemiliste ravimite mõju uurimiseks., jooksev ja lõplik desinfitseerimine.
Laboratoorse diagnoosi panemine on seotud puhaskultuuris saadud mikroorganismide süstemaatilise asukoha selgitamisega (puhaskultuur on sama liigi mikroobide kogum toitekeskkonnas).
Patsiendilt eraldatud mikroorganismide uurimisel on sageli vajalik tingimus puhaskultuuri saamine.
Mikroorganismide liigi määramine hõlmab mitmete mikroorganismide tunnuste määramist: raku morfoloogia, kultuuri kasvu iseloom erinevatel toitainetel, võime kasutada teatud keemilisi ühendeid, seos temperatuuriga, keskkonna pH, hapnik jne. , mikroorganismide liikide määramiseks on sageli vaja teada ainevahetusprodukte, antigeenseid omadusi, rakkude nukleotiidide koostist, ensüümide komplektiga seotud biokeemilist aktiivsust ja palju muud.
Kõigi nende omaduste kindlaksmääramine võimaldab tuvastada mikroorganisme.
Mikroorganismide identifitseerimine on väga oluline infektsioonide diagnoosimisel, patogeeni allikate ja levikuteede väljaselgitamisel.
Mis tahes mikroorganismi tuvastamiseks on vaja koguda isendeid puhaskultuuris ja vajalikus koguses.
Mikroorganismide isoleerimiseks, kasvatamiseks, akumuleerimiseks ja säilitamiseks kasutavad nad toitekeskkonda, mis sisaldab kõiki mikroobidele vajalikke toitaineid ning simuleerib mikroorganismide elupaika looduslikes tingimustes.
Kõik söötmed peavad vastama järgmistele nõuetele:
1) toitainete ja kasvufaktorite olemasolu kergesti seeditavas vormis;
2) steriilsus – elujõuliste mikroorganismide ja eoste puudumine;
3) isotoonilisus - samasugune mineraalsoolade sisaldus rakus sees ja väljaspool. Patogeensete mikroorganismide puhul, mis on kohanenud pikaks ajaks inimkehas viibimiseks, loetakse 0,85% naatriumkloriidi lahust isotooniliseks. Näiteks ookeanis (soolavees) elavate mikroorganismide puhul tekib isotoonilisus erineva soolakontsentratsiooniga, kuid toitainete keskkonna isotoonilisuse nõue jääb alles;
4) keskkonna optimaalne pH. Toitekeskkonna redokspotentsiaali tekitavad vesinikioonid, mis aitab kaasa mikroobsete ensüümide normaalsele talitlusele;
5) keskkonna läbipaistvus. Kuna enamik baktereid, on toitainete söötmel üks peamisi kasvu tunnuseid hägusus (vedelal söötmel - hägusus, sete, kile või segatud; tahkel söötmel - kolooniate moodustumine).
Mõnede mikroorganismide kasvu toitekeskkonnas kõige olulisem tunnus: leptospira puhul - toitekeskkonna hägususe puudumine (nende mikroorganismide kasvu ja paljunemise jälgimine toimub faasikontrastmikroskoobi abil), mükoplasmade ja põhjuslike tegurite puhul. tuberkuloosi tekitaja - aeglane kasv (hägusus või kolooniate ilmumine mitte varem kui 21 päeva pärast või isegi hiljem).
Toitekeskkonnad on mikrobioloogilise töö aluseks ja nende kvaliteet määrab sageli ka uuringu tulemused. Seetõttu tuleks söötme valikul arvestada nii mikroobide nõudeid nende elutegevuseks vajalikele ainetele kui ka nende võimet teostada antud tingimustes ainevahetust raku ja keskkonna vahel.
Toitekeskkond peab looma optimaalsed (parimad) tingimused mikroobide eluks.
Biosünteesi, kasvu ja paljunemise läbiviimiseks peab rakk väljastpoolt vajalikus koguses vastu võtma kõik selles sisalduvad elemendid ning olema varustatud energiaallikaga. Vastavalt sellele, milliseid elemente täpselt rakku toimetatakse, nimetatakse toitekeskkonna aineid süsiniku, lämmastiku, fosfori, väävli jne allikateks.
Ühendid, mille kujul tuleb konstruktiivsetel eesmärkidel vajalikke elemente söötmesse viia, määravad mikroorganismide sünteetilised võimed.
Energiaallika vorm määratakse selle tootmismeetodi järgi.
Mikroorganismide sünteetilised võimed ja energia hankimise viisid on äärmiselt mitmekesised ning seetõttu on ka nende vajadused toiduallikate järele erinevad. Seda asjaolu tuleb toitekeskkonna valmistamisel arvesse võtta, mõistes selgelt, et universaalseid söötmeid, mis sobivad eranditult kõigi mikroorganismide kasvuks, ei eksisteeri.
Seega määravad toitekeskkonna koostise eelkõige mikroorganismide ainevahetuse omadused ja mitmekesisus.
Mikroorganismidele, nagu ka teistele elukatele, on vajalikeks toitaineteks süsinik, lämmastik, väävel, fosfor, tuhaelemendid ning paljude mikroorganismide jaoks mitmesugused lisatoitained nagu vitamiinid, kasvufaktorid jne.
Paljud mikroorganismid, nagu ka kõrgemad loomad, vajavad lisaks tavapärastele süsiniku, lämmastiku, mineraalsoolade ja muude elementide allikatele, mis on neile energia- ja sünteesimaterjaliks, ka väga olulisi kasvufaktoreid. Kasvufaktorite eripäraks on nende aktiivsus äärmiselt väikestes kogustes.
Kasvufaktori avastas Wilde esmakordselt 1901. aastal pärmi kasvatamisel. Ta märkas, et kui sünteetilist söödet nakatati väikese koguse pärmiga, ei täheldatud kasvu. Kui aga samaaegselt pärmi külvamisega lisatakse toitekeskkonnale keetmisega tapetud pärm, ilmneb kasv. Wilde selgitas seda nähtust teatud kasvufaktori olemasoluga pärmirakus, mida ta nimetas "BIOS-iks".
BIOS-i olemuse uuring näitas, et see on mitme komponendi segu. BIOS jagati kaheks osaks "BIOS"-1 ja "BIOS" -2. Mõlemad fraktsioonid eraldi võetuna on passiivsed. Nende võime mikroobide kasvu stimuleerida ilmneb ainult siis, kui nad tegutsevad koos. "BIOS"-1 on inositool, "BIOS"-2 sisaldab vaba karboksüülrühmaga heterotsüklilist ringi.
BIOS-iga sarnased ained osutusid vajalikuks paljude mikroorganismide kasvufaktoritena. Mõned mikroorganismid nõuavad B-vitamiini lisamist toitekeskkonnale.
B-vitamiini vajaduse järgi jagunevad bakterid nelja rühma:
a) bakterid, mis kasvavad puljongis ilma B-vitamiinita. Need bakterid ei kasva sünteetilises keskkonnas (tüüfuse ja düsenteeria batsillid, püogeenne stafülokokk);
b) bakterid, mis ei vaja B-vitamiini eksogeenset varu. Need bakterid kasvavad vitamiinivabas puljongis ja sünteetilises keskkonnas (Escherichia coli, Vibrio cholerae, Pseudomonas aeruginosa, siberi katk jne). Selle rühma mikroobid on võimelised ise sünteesima B-vitamiini;
c) vitamiinivabal söötmel halvasti kasvavad bakterid (meningokokk, difteeria tekitaja);
d) bakterid, mis ei kasva vitamiinivabal söötmel (hemolüütiline streptokokk, pneumokokk).
On kindlaks tehtud, et B-vitamiinidel on võime stimuleerida propioonhappe- ja piimhappebakterite kasvu ja happe moodustumist.
Gripibatsill, läkaköha ja sangroosi tekitajad, vajab kasvufaktorit, mis koosneb X- ja Y-faktoritest. Mõlemaid tegureid leidub veres, aga ka kartulites ja teistes taimeekstraktides.
X-faktor on termostabiilne, see on hematiin ja seda saab asendada mõnede anorgaaniliste rauaühenditega, millel on oksiidi või katalaasi aktiivsus. Hematiin ja teised rauaühendid on vajalikud hingamisprotsessides osalevate tsütokroomide sünteesiks.
Y-faktor on vitamiini iseloomuga, hävib autoklaavimisel ning seda toodavad bakterid, pärm, looma- ja taimerakud.
Anaeroobne mikroob Bac. sporogenes kasutab kasvufaktorina küllastumata rasvhappeid. Selle olemasolu on vajalik ka Cl.botulinum ja Cl kasvuks. Perfringens. Seda ainet moodustavad paljud aeroobsed bakterid, näiteks tüüfus, tuberkuloosibatsillid ja hallitusseened. Ilmselgelt on see aine vajalik kõigi mikroorganismide eluks, kuid anaeroobsetel klostriididel puudub võime seda ise sünteesida.
Väga aktiivne universaalse bioloogilise levikuga kasvufaktor on pantoteenhape. Nikotiinhappe amiid toimib stafülokokkide kasvufaktorina. Ilma selleta ei kasva stafülokokid sünteetilisel söötmel, mis sisaldab hüdrolüüsitud želatiini, trüptofaani, türosiini, tsüstiini ja glükoosi. Nikotiinamiidi sünteesivad soole- ja tüüfuse batsillid, samuti Vibrio cholerae.
Kasvufaktorite hulka kuuluvad mõned aminohapped (vajalikud valgusünteesiks), puriin- ja pürimidiinialused (kasutatakse nukleiinhapete konstrueerimiseks) jne. Paljud kasvufaktorid on osa erinevatest ensüümidest ja mängivad bioloogilistes protsessides katalüsaatori rolli. Bakterite kasvufaktorite küsimus on väga oluline. Ühelt poolt aitab see mõista lihavee füsioloogilist rolli, mida kasutatakse laboratoorsete toitekeskkondade valmistamiseks paljude mikroorganismide kasvatamiseks. Teisalt võimaldab kasvufaktorite küsimuse lahendamine sünteetilisi söötmeid laialdasemalt kasutada mikroobide kasvatamiseks.
Sama mikroorganismi toitesöötmed võivad olenevalt uuringu eesmärkidest olla erinevad. Näiteks võivad mikroobikultuuride elulise aktiivsuse pikaajaliseks säilitamiseks sobivad söötmed oluliselt erineda teatud ainevahetusproduktide tootmiseks mõeldud söötmetest, kui on vaja stimuleerida mikroobide elutegevuse teatud aspekte. Eoste ja muude elutsüklivormide tekkeks on vaja spetsiaalseid keskkondi.
Võimaluse korral tuleks toitekeskkonnad standardiseerida, st sisaldada konstantses koguses üksikuid koostisosi. Põllukultuuride kasvu ja välismaiste mikroorganismidega saastumise jälgimise hõlbustamiseks peab toitainekeskkond olema läbipaistev.
Toitekeskkonnad jagunevad koostise järgi looduslikeks, sünteetilisteks ja poolsünteetilisteks.
Looduslikke keskkondi nimetatakse tavaliselt söötmeteks, mis koosnevad loomse või taimse päritoluga saadustest ja millel on keeruline, ebakindel keemiline koostis. Selliste söötmete aluseks on roheliste taimede erinevad osad, loomsed kuded, linnased, pärm, puuviljad, juurviljad, sõnnik, pinnas, merevesi, järved ja mineraalveeallikad. Enamikku neist kasutatakse ekstraktide või infusioonide kujul.
Paljud mikroorganismid arenevad hästi looduslikus söötmes, kuna sellised söötmed sisaldavad reeglina kõiki mikroobide kasvuks ja arenguks vajalikke komponente. Ebakindla koostisega söötmetest on aga vähe kasu mikroorganismide ainevahetuse füsioloogia uurimisel, kuna need ei võimalda arvestada mitmete söötme komponentide tarbimist ega saada teada, millised ained tekivad selle käigus. mikroorganismide areng.
Ebakindla koostisega looduslikke söödeid kasutatakse peamiselt mikroorganismide kultuuride säilitamiseks, nende biomassi kogumiseks ja diagnostilistel eesmärkidel.
Ebakindla koostisega söötmed hõlmavad ka nn poolsünteetilisi aineid. Nende koostis koos tuntud keemilise olemusega ühenditega sisaldab ebakindla koostisega aineid. Selliseid keskkondi kasutatakse eriti laialdaselt tööstuslikus mikrobioloogias aminohapete, vitamiinide, antibiootikumide ja muude oluliste mikroobse aktiivsuse toodete tootmiseks.
Sellise söötme näiteks on lihapeptoonpuljong (MPB), mis koos lihaekstrakti ja keeruka koostisega peptooniga sisaldab naatriumkloriidi, kaaliumfosfaati ja mõnikord ka glükoosi või sahharoosi. Poolsünteetiliste söötmete hulka kuuluvad ka glükoosi ja peptooniga kartulisöötmed.
Sünteetilised keskkonnad on söötmed, mis sisaldavad ainult teatud keemiliselt puhtaid ühendeid, mis on võetud täpselt kindlaksmääratud kontsentratsioonides.
Sünteetilised söötmed on kõige mugavamad mikroorganismide ainevahetuse uurimiseks. Teades keskkonda sattunud komponentide täpset koostist ja kogust, on võimalik uurida nende tarbimist ja muutumist vastavateks ainevahetusproduktideks.
Toitekeskkonnad on selektiivsed, diferentsiaaldiagnostilised ja säilitusained.
Valikulised söötmed tutvustasid mikrobioloogilisse praktikasse S. N. Vinogradsky ja M. Beyerinck. Need on toitekeskkonnad, milles ühe või mitme keemilise ühendi lisamisega luuakse optimaalsed tingimused ühte tüüpi mikroorganismide (või nendega seotud mikroorganismide rühma) kasvuks ja paljunemiseks ning ebasoodsad tingimused kõigile teistele. Selliseid söötmeid kasutatakse peamiselt mikroorganismide puhaskultuuri eraldamiseks nende looduslikest elupaikadest ja kultuuride masside kogumiseks (puhaskultuuri eraldamise keemiline meetod). Näiteks toitekeskkond, milleks on kalgendatud hobuseseerum, on selektiivne sööde difteeriabakteritele, aluseline peptoonvesi Vibrio cholera jaoks, sapipuljong kõhutüüfuse tekitajale, maksapuljong Brucellale jne.
Mikroobide kogunemine selektiivsesse toitainekeskkonda on paljudel juhtudel oluline eeletapp puhaskultuuride eraldamisel algsetest katsematerjalidest (näiteks Vibrio cholerae või tüüfusebakterid patsientide või kandjate väljaheitest jne).
Diferentsiaaldiagnostika söötmed on need, mis sisaldavad lisaks mikroorganismide kasvu ja arengut tagavatele ainetele teatud ensüümide substraadina kasutatavaid aineid. Substraadi kvalitatiivse muutuse põhjal määratakse konkreetse ensüümi olemasolu (hinnatakse indikaatori abil, mis reageerib substraadi lagunemissaaduste esinemisele toitekeskkonnas).
Iga mikroorganismi tüüpi iseloomustab üsna stabiilne ensüümide komplekt. Ensüümide komplekti määramine diferentsiaaldiagnostika söötme abil võimaldab eristada mikroorganismide tüüpe. Näiteks vereagar võimaldab tuvastada ensüümi hemolüsiini, His söödet - sahharolüütilisi ensüüme (süsivesikuid), želatiini kasutatakse mikroobide proteolüütiliste omaduste arvestamiseks jne.
Vere agar. Hemolüsiini ensüümi olemasolu hinnatakse punaste vereliblede hävimise ja vereagaril kasvatatud mikroobide ümber heleda tsooni moodustumise järgi.
Tema meedia. Ensüümide – karbohüdraaside olemasolust, mis lagundavad süsivesikud happeks, annab märku söötme pH muutus happelise poole suunas ja toitekeskkonna värvuse muutumine. Ensüümide komplekti erinevust saab kasutada nii isoleeritud kultuuri puhtuse kontrollimiseks kui ka ühe liigi kiireks eristamiseks teistest nakkusohtliku materjali inokulatsioonide esmasel uurimisel.
Säilituskeskkond on ette nähtud katsematerjali esmaseks külvamiseks ja transportimiseks. Nad hoiavad ära patogeensete mikroorganismide surma ja pärsivad saprofüütide arengut. Näiteks on glütseriini segu, mida kasutatakse väljaheite kogumiseks teatud tüüpi bakterite tuvastamiseks tehtud testides.
Füüsikalise oleku järgi jagatakse keskkonnad vedelateks, tihedateks, poolvedelateks ja teralisteks. Mikroorganismide füsioloogiliste ja biokeemiliste omaduste selgitamiseks, samuti nende biomassi või ainevahetusproduktide kogumiseks on kõige mugavam kasutada vedelat söödet. Tahket söödet kasutatakse puhaskultuuride isoleerimiseks, isoleeritud kolooniate saamiseks, kultuuride säilitamiseks ja mikroorganismide kvantifitseerimiseks, nende antagonistlike omaduste määramiseks ja paljudel muudel juhtudel. Pooltahket söödet kasutatakse tavaliselt mikroobikultuuride pikaajaliseks säilitamiseks. Söötme tihendamiseks kasutatakse agarit - agarit, želatiini ja ränihappegeeli.
Tööstuslikus mikrobioloogias kasutatakse nn massilist toitainekeskkonda. Sellisteks söötmeteks on näiteks keedetud hirss, toitelahuses leotatud kliid jne.
Toitekeskkond võib olla lihtne või keeruline. Lihtsad vedelad toitainekeskkonnad on peptoonvesi, liha-peptoonpuljong (MPB). Tihedate lihtsate toitainete söötmete hulka kuuluvad liha - peptoonagar (MPA) ja liha - peptoonželatiin.
Lihtsad toitekeskkonnad, eriti MPB ja MPA, on aluseks nendest keerukamate söötmete valmistamisel, lisades neile erinevaid substraadi toiteväärtust tõstvaid aineid. Näiteks tekib glükoosi lisamisel suhkrupuljong või suhkruagar; astsiit - agar ja astsiit - puljong saadakse astsiidivedeliku lisamisega; Täisveri on vereagari ja verepuljongi komponent ning vereseerumi lisamisel tekib seerumi sööde (agar või puljong).
Keerulisema koostisega söötmed on tavaliselt mõeldud toitainesubstraatide suhtes nõudlike ja lihtsal söötmel mittepaljunevate mikroobide kasvatamiseks. Selliste mikroorganismide hulka kuuluvad gonorröa, difteeria, brutselloosi, tulareemia, süüfilise, korduva palaviku, rinoskleroosi, tuberkuloosi jne patogeenid.
Toitekeskkonnad klassifitseeritakse sõltuvalt algkomponentidest, konsistentsist, sihtotstarbest ja keemilisest koostisest.
Sõltuvalt keemilisest koostisest ja algkomponentidest eristatakse järgmist tüüpi toitainekeskkondi.
Ebakindla keemilise koostisega keskkonnad. Need jagunevad: 1) loomse päritoluga söötmed (algtooted - liha, kala, munad, piim jne); 2) taimset päritolu söötmed (algtooted - sojaoad, herned, kartul, porgand jne).
Osa tooteid kasutatakse nende loomulikul kujul (kartul, porgand, piim jne), kuid sagedamini töödeldakse loomseid ja taimseid kudesid mitmel viisil (ekstraheerimine, ensümaatiline või happeline hüdrolüüs).
Teadaoleva keemilise koostisega söötmed(sünteetiline). Need sisaldavad teadaolevaid keemilisi ühendeid (soolasid, süsivesikuid, aminohappeid, vitamiine jne) optimaalses kvantitatiivses vahekorras. Sünteetilisi toitekeskkondi kasutatakse siis, kui kasvanud rakumass on vaja maksimaalselt vabastada tavasöötmes sisalduvatest ballast-orgaanilistest ühenditest, näiteks diagnostiliste allergeenide hankimisel või mikroorganismi metaboolsete vajaduste uurimisel konkreetse keemilise ühendi järele.
Konsistentsi alusel eristatakse toitainekeskkondi tahkeks, poolvedelaks ja vedelaks.
Vedel toitainekeskkond. Valmistamisel kasutatakse ekstrakte, hüdrolüsaate, lähteproduktide lahuseid.
Poolvedel ja tahke toitainekeskkond. Vajalik konsistents antakse söötmele erinevate hermeetikute lisamisega.
Agar-agar (Malayan Jelly) on polüsahhariid, teatud merevetikate töötlemise saadus. Sulab 80...86 ºС, kõveneb 40 ºС. Tiheda söötme saamiseks lisatakse seda koguses 1,5...2%, harvem 3%; poolvedel - 0,3...0,7%.
Želatiin on väljavõte kudedest, mis sisaldab palju kollageeni (luud, kõhred, kõõlused jne). Želatiingeel sulab 25 °C juures, mistõttu on see 37...38 °C temperatuurioptimumiga mikroorganismide kasvatamisel ebamugav. Lisaks eritavad mitmed bakterid proteolüütilisi ensüüme, mis lagundavad želatiini. Tavaliselt lisatakse söötmele 10...20% želatiini.
Vastavalt kasutusotstarbele eristavad nad üldkasutatavat (põhi-), rikastatud-, eri-, selektiiv- (selektiivne) ja diferentsiaaldiagnostilist toitainekeskkonda.
Levinud (põhi)keskkonnad. Neid kasutatakse suhteliselt tagasihoidlike mikroorganismide kasvatamiseks.
Põhisöötme valmistamise lähtekomponentideks on enamasti lihavesi, Hottingeri seedimine ja taimsed hüdrolüsaadid.
Lihavesi: veiseliha vabastatakse luudest, rasvast, kõõlustest ja lastakse läbi hakklihamasina. Hakkliha valatakse kraaniveega vahekorras 1 : 2, keedetakse 1 tund. Pärast keetmist lihavesi jahutatakse, filtreeritakse läbi vati-marli filtri, lisatakse seejärel kraaniveega esialgse mahuni, valatakse konteinerid, suletakse puuvillase marli korgiga ja steriliseeritakse 120 °C juures 20 minutit.
Hottingeri seedimine valmistatakse lihajäätmetest trüptilise hüdrolüüsi teel. Rasv, sidekirme, kõõlused hakitakse peeneks, valatakse keeva veega vahekorras 1:2, keedetakse, jahutatakse temperatuurini 45 °C ja lisatakse pankreatiin, leelitatakse naatriumkarbonaadi lahusega pH väärtuseni 7,8...8,0, loksutatakse ja lisatakse kloroformi. (10 ml/l), tihedalt suletuna, hoida soojas 10 päeva, saadakse hüdrolüüsiprodukt (digest).
Liha-peptoonpuljong (MPB). 1 liitrile lihaveele lisada 1% peptooni ja 0,5% naatriumkloriidi, seadistus
Riis. 32. Agari kaldjoonte valmistamine
Nõutav pH saavutatakse 10% naatriumhüdroksiidi või kaaliumhüdroksiidi lahuse fraktsioneeriva lisamisega. Filtreerida läbi paberfiltri, valada kolbidesse, katseklaasidesse ja steriliseerida 120 °C juures 15...20 minutit.
Liha-peptoonagar (MPA): lisada MPB-le 2...3% pestud, peeneks hakitud agar-agarit, kuumutada kuni agar sulamiseni, lasta keema, kontrollida kuumalt pH-d, seejärel viia vajadusel. soovitud väärtuseni ( 7,2...7,6), filtreeritakse läbi puuvillase marli filtri. Filtreeritud kuum agar valatakse katseklaasidesse ja kolbidesse, steriliseeritakse autoklaaviga 1 atm juures 20...30 minutit. Inokuleerimiseks sobiva kaldse agaripinna saamiseks jäetakse sula MPA-ga torud pärast steriliseerimist toatemperatuurile, kuni need on kaldasendis tihendatud (korgiga ots on üles tõstetud) (joonis 32).
Laialdaselt kasutatakse mikroorganismide kasvatamist tahkel toitainekeskkonnas Petri tassidel. Tavalise Petri tassi (joonis 33) läbimõõt on umbes 10 cm, toodetakse väiksema ja suurema läbimõõduga nõusid, aga ka ühekordseid plastnõusid. IN
standardsed steriilsed Petri tassid valatakse põleti leegile umbes 20 ml sulatatud ainega ja jahutatakse temperatuurini 45...50 "C toitaineagariga, nõud asetatakse horisontaalsele pinnale kuni agar kõvenemiseni.
Poolvedel lihapeptoonagar (MPA) valmistatakse nagu MPA, kuid lisatakse 0,25% agarit. Keeda segades, kuni agar täielikult sulab, sea pH väärtusele 7,2...7,6, filtreeri kuumalt, steriliseeri autoklaavis.
Liha-peptoonželatiin (MPG): MPB-le lisatakse 10...20% purustatud želatiini, kuumutatakse kuni hermeetiku sulamiseni, pH seatakse 7,2...7,4, keedetakse, filtreeritakse läbi vati-marli filtri, valatakse. katseklaasidesse ja steriliseerida fraktsionaalselt Kochi aparaadis kolm päeva 20 minutit või üks kord autoklaavis 112°C juures 15 minutit.
Hottingeri puljong: Hottingeri aluseline seedimine lahjendatakse kraaniveega vahekorras 1:5 (1:8) amiini lämmastikusisalduseni 120 mg%, lisage 0,5% naatriumkloriidi, 0,1 g kaaliumvesinikfosfaati, seadke pH väärtusele 7,4... 7,6, keeta 15...20 minutit, filtreerida läbi vati-marli või paberfiltri, valada anumatesse ja steriliseerida 120 °C juures 20...30 minutit.
Hottingeri agar valmistatakse, lisades Hottingeri puljongile 2% agarit.
Bioloogiatööstuse ettevõtted toodavad valmistoitepuljongit ja agarit kuiva pulbri kujul.
Toitepuljong sisaldab (g/l): kilu trüptiline hüdrolüsaat - 10,05, naatriumkloriid - 4,95. 15 g pulbri proov lahustatakse 1 liitris destilleeritud vees, keedetakse 2 minutit, filtreeritakse läbi paberfiltri, valatakse anumatesse ja steriliseeritakse autoklaavis 120 ºC juures 20 minutit (pH 7,3).
Toiteagar sisaldab (g/l): söödapärmi ensümaatilist hüdrolüsaati - 12,0; agar - 12,5; naatriumkloriid - 5,5. Pulbri proov massiga 36 g lahustatakse 1 liitris destilleeritud vees, keedetakse 3 minutit, filtreeritakse läbi puuvillafiltri ja steriliseeritakse 120 °C juures 20 minutit (pH 7,3).
Rikastatud keskkonnad. Paljud patogeensete bakterite tüübid ei kasva üldkasutatavatel toitainetel hästi, seetõttu lisatakse põhisöötmele verd, vereseerumit, süsivesikuid jne. Selliseid toitekeskkondi nimetatakse rikastatuks.
Seerumi- ja vereagarid: 5...10% steriilset defibrineeritud lamba (küüliku) verd või vereseerumit (hobune, veis, küülik) lisatakse sulatatud ja jahutatud 45...50°C steriilsele toitaineagarile. Lamba defibrineeritud vere saamiseks võetakse aseptiliselt kägiveenist veri steriilse nõelaga steriilsesse pudelisse (või kolbi) klaas (portselan) helmeste või kuulidega, loksutatakse pöörlevate liigutustega 15...20 minutit, et vältida. vere hüübimist. Fibriin jääb helmestele.
Komponendid segatakse, valatakse Petri tassidesse, katseklaasidesse ja jäetakse toitainekeskkonna kõvenemiseni.
Vadaku- ja verepuljongid valmistatakse sarnasel viisil.
Süsivesikute (glükoos jne) lahused steriliseeritakse voolava auru või filtreerimise teel ja lisatakse 0,5...1% toitekeskkonnale.
Erilised keskkonnad. Nii nimetatakse söötmeid, mis on välja töötatud mitmete bakterite spetsiifilisi kasvuvajadusi arvesse võttes. Näiteks McCoy munakollase sööde tulareemia tekitaja jaoks, Terskikhi sööde Leptospira kasvatamiseks jne.
McCoy sööde: puhtaid kanamune töödeldakse alkoholiga ja lastakse kiiresti läbi põleti leegi. Avage steriilselt, munakollased eraldatakse valgetest. 60 osale munakollastele lisada 40 osa füsioloogilist lahust (pH 7,0...7,2). Komponendid segatakse, valatakse 4...5 ml katseklaasidesse ja asetatakse kaldus asendisse seerumi hüübimisaparaati. Steriliseerige esimesel päeval 75 °C juures 1 tund, teisel päeval 85 °C juures 30 minutit. Steriilsuse kontrollimiseks hoitakse ettevalmistatud söödet 2 päeva termostaadis 37...38 °C juures.
Terskikhi sööde koosneb Zerenseni ja küüliku seerumi fosfaadi segust. Zerenseni segu: lahus A: naatriumvesinikfosfaat - 11,876 g, destilleeritud vesi - 1000 ml; lahus B: kaaliumdivesinikfosfaat - 9,078 g, destilleeritud vesi - 1000 ml. 90 ml lahusele A lisatakse 10 ml lahust B ja maht reguleeritakse destilleeritud veega 1000 ml-ni. Lahus valatakse 5 ml katseklaasidesse ja steriliseeritakse 1,5 atm juures 20 minutit. Lisage igasse katsutisse kuus kuni kaheksa tilka 56 °C juures inaktiveeritud steriilset küüliku seerumit.
Valikkeskkonnad(ladina keeles electus – valitud). See on toitev
keskkonnad teatud tüüpi mikroorganismide selektiivseks isoleerimiseks ja akumuleerimiseks mitut tüüpi mikroobe sisaldavatest materjalidest. Valikkeskkonnad on oma koostiselt äärmiselt mitmekesised. Need sisaldavad komponente, mis tagavad soovitud mikroorganismi eelistatud kasvu ja
(või) sellega kaasneva kasvu ühel või teisel määral allasurumine
mikrofloorat. Seda tüüpi kandja konsistentsi järgi võib see olla
tihe ja vedel. Vedelaid valikaineid nimetatakse rikastus- või akumulatsioonikeskkondadeks; neid kasutatakse paigutamisel
Eesmärk on suurendada soovitud mikroorganismi hulka segapopulatsioonis.
Piima-soola agar on ette nähtud stafülokokkide selektiivseks kasvatamiseks. 5...7,5% naatriumkloriidi sisaldava pH-ga 7,2...7,4 sulanud MPA lisamiseks lisage 10% steriilset lõssi, segage ja valage Petri tassidesse.
Shustova sööde on ette nähtud salmonella isoleerimiseks. See on MPA (pH 7,4), millele on söötme mahule lisatud 10% 50% naatriumtiosulfaadi vesilahust ja 2% Lugoli lahust.
Rappoport sööde on ette nähtud salmonella kasvatamiseks. MPB-le lisatakse 1% glükoosi, 10% sappi, 1% Andrede indikaatorit. Steriliseerige voolava auruga.
Mulleri sööde on ette nähtud salmonella kasvatamiseks. 90 ml MPB valatakse 4,5 g steriilse kriidiga kolbi, steriliseeritakse autoklaavis temperatuuril 120 ° C 30 minutit Seejärel lisatakse steriilselt 2 ml Lugoli lahust ja 10 ml naatriumtiosulfaadi lahust (naatriumtiosulfaat - 50 g , destilleeritud vesi - 100 ml), steriliseeriti Kochi aparaadis 30 minutit.
Kauffmani sööde on salmonelloosi rikastav sööde. 100 ml Mülleri söötmele lisage 1 ml briljantrohelise vesilahust, mis on lahjendatud 1:1000, ja 5 ml steriilset veise sapi. Segu steriliseeritakse jooksva auruga 30 minutit.
Bordetella kasvatamiseks kasutatakse penitsilliiniga kaseiin-söe agarit (CCA). 1000 ml destilleeritud veele lisage kaseiinhüdrolüsaat - 20 ml, naatriumkloriid - 5 g, kaaliumkloriid - 0,2 g, kaltsiumkloriid - 0,002 g, naatriumkarbonaat - 0,4 g, magneesiumkloriid - 0,025 g, kaaliumvesinik - 0,2 fosfaat. g, lahustuv tärklis - 1 g, tsüstiin - 0,01 g, agar - 20 g Komponendid lahustatakse, pH seatakse väärtusele 7,2, steriliseeritakse 0,5 atm juures 30 minutit. Enne kasutamist lisage sulaagarile (50 °C) 3% pärmiekstrakti ja 0,2% kuiva aktiivsütt ja 0,5 U/ml penitsilliini. Komponendid segatakse ja valatakse Petri tassidesse.
Diferentsiaaldiagnostika keskkonnad. Mõeldud ensüümide tuvastamiseks mikroorganismides. Konsistents võib olla vedel, poolvedel, tihe. Nende söötmete koostis sisaldab põhilist toitekeskkonda, mis tagab uuritava mikroorganismi kasvu, substraati ensüümi tuvastamiseks ja indikaatorit, mille värvimuutus viitab söötme pH muutusele. substraadi lagunemine.
Seda tüüpi toitainete hulka kuuluvad Gissa, Endo, Ploskirev, Levin jne.
Hiss söödet kasutatakse isoleeritud mikroorganismide kultuuride ensümaatiliste omaduste uurimiseks. 100 ml destilleeritud veele lisada 1% peptooni, 0,5 g naatriumkloriidi. Komponendid lahustatakse, filtreeritakse läbi paberfiltri, seatakse pH väärtusele 7,0...7,4, lisatakse üks süsivesikute substraatidest (laktoos, glükoos jne), agar-agar (0,3...0,4%) ja seejärel. 1 ml Andrede indikaatorit või 0,1 ml 1,6% bromotümoolsinise lahust. Valmistatud sööde valatakse 3 ml katseklaasidesse ja steriliseeritakse voolava auruga kolm päeva järjest 30 minutit või 112 °C juures 20 minutit.
Nad toodavad BP indikaatoriga kuiva Hissi söödet - sinise vesilahuse ja rosoolhappe segu (valmis söötmed on poolvedela konsistentsiga).
Patogeenide esmaseks isoleerimiseks materjalist kasutatakse tihedaid diferentsiaaldiagnostilisi sööteid. Lisaks teadaolevale substraadile sisaldab nende koostis sageli aineid, mis annavad toitainekeskkonnale selektiivsed omadused.
Endo sööde sisaldab substraadina laktoosi ja on loodud eristama baktereid, mis erinevad oma võime poolest laktoosi lagundada.
1000 ml sulanud MPA-le (pH 7,4) temperatuuril 70 ° C lisage 1 g laktoosi, mis on eelnevalt lahustatud väikeses koguses destilleeritud keedetud vees. Eraldi katseklaasides valmistada: 2...3 ml aluselise fuksiini alkoholilahust; 10 ml 10% naatriumsulfaadi vesilahust.
Lisage 1 ml fuksia lahust steriilsesse katseklaasi ja lisage naatriumsulfiti lahust, kuni fukssiin muutub värvituks. Valmistatud segu valatakse sulaagarisse, segatakse ja valatakse Petri tassidesse. Valmistatud sööde on värvitu, kui sellel kasvavad laktoosi lagundavad mikroorganismid, sööde hapestub, värvunud fukssiin taastub ja mikroorganismi koloonia, näiteks Escherichia, omandab metallilise varjundiga punase värvuse. Sööde valmistatakse üks päev enne selle kasutamist. Nad toodavad ka Endo kuiva söödet. Enne kasutamist lisatakse destilleeritud veele teatud kogus pulbrit, keedetakse ja valatakse Petri tassidesse.
Levini sööde on otstarbelt sarnane Endo söötmega, kuid sisaldab erinevat indikaatorit (eosiin metüleensinisega). 100 ml sulanud MPA-le (pH 7,2...7,4) lisage 2 ml metüleensinise 0,5% vesilahust, 1,5 ml eosiinkollase 2% lahust, 2 g laktoosi, 0,2 g kaaliumdivesinikfosfaati. Värvilahused valmistatakse destilleeritud vees ja steriliseeritakse jooksva auruga 60 minutit. Laktoos ja kaaliumdihüdrofosfaat lahjendatakse eelnevalt väikeses koguses steriilses destilleeritud vees ja keedetakse. Sellel söötmel olevad laktoospositiivsete bakterite kolooniad on lillakasmustad.
Ploskirevi agar on mõeldud salmonelloosi isoleerimiseks, sisaldab substraadina laktoosi ja kaasneva mikrofloora kasvu pärssivaid komponente. Söödet toodetakse pulbrina, see sisaldab lisaks toitaineagar-alusele: sappsoolasid, naatriumtsitraati, naatriumtiosulfaati, naatriumfosfaati, briljantrohelist, sooda, joodi, naatriumkloriidi, laktoosi, neutraalset punast. Pulbri proov lahustatakse vees, keedetakse ja valatakse Petri tassidesse. Valmistatud sööde on selge või roosakas. Salmonella kolooniad on värvitud, Escherichia kolooniad on pohlavärvi.
Mikroorganismide kasvatamise meetodid. Erinevate füsioloogiliste rühmade mikroorganismide kasvatamisel on üldpõhimõtete kõrval mõned tunnused: Aeroobsete ja fakultatiivsete anaeroobsete bakterite kasvatamine. Mikroorganismide puhaskultuuridega või uuritava materjaliga külvatud tahked, vedelad või poolvedelad toitekeskkonnad asetatakse termostaatidesse (joonis 34), mis hoiavad antud mikroorganismi jaoks optimaalset temperatuuri. Normaalsest ülemisest piirist kõrgemal temperatuuril bakterid mitte ainult ei aeglusta oma kasvu, vaid ka surevad kiiresti. Optimaalsest madalamal temperatuuril mikroorganismi kasvukiirus järk-järgult aeglustub.
Mesofiilide jaoks on temperatuuri optimum vahemikus 30...37 ºС, psührofiilidel - 10... 15 ºС, termofiilidel - 50...60 ºС.
Toitekeskkonnas kultiveerimisel olevad mikroorganismid, tingimusel et söötmele ei lisata täiendavaid aineid, aeglustuvad järk-järgult ja peatuvad seejärel toitainesubstraadi ammendumise, biofüüsikaliste näitajate optimaalsete väärtuste (pH, pH) tõttu. Eh jne). Sellist mikroorganismide kasvatamist nimetatakse perioodiliseks. Kui põllukultuuride inkubeerimise ajal vedelat toitekeskkonda ei segata, loetakse see kultiveerimisviis statsionaarseks. Diagnostiliste bakterioloogiliste uuringute jaoks kasutatakse tavaliselt seda kultiveerimismeetodit. Bioloogiatööstuses, vaktsiinide ja muude bioloogiliste toodete valmistamisel, kui on vaja saavutada maksimaalne bakterimassi või eksotoksiinide saagikus, kasutatakse perioodilist kasvatamist vedelsöötmes koos intensiivse segamisega.
Sellisteks ülesanneteks kasvatatakse aeroobseid baktereid kolbides ja pudelites Schütteli seadmetel võnkesagedusega 150... 250 min-1, mis hõlbustab hapniku ja toitekomponentide ülekandmist bakteritele.
Riis. 35. Fermentaatori skeem aeroobsete mikroorganismide süvakultiveerimiseks.
1 – õhu sisselaskeava; 2 – õhu väljalaskeava; 3 – kaitserauad; 4 – segisti; 5 - mullitaja
Kõige tõhusam bakterite kasvatamine vedelas toitekeskkonnas koos maksimaalse bioproduktide saagisega saavutatakse fermentaatorites. Fermentaatorid (reaktorid) on metallist või klaasist kultuurianumad mahuga 500 ml kuni 1000 l (joonis 35). Baktereid fermentaatorites kasvatades söödet segatakse spetsiaalsed segistid koos vajaliku koguse steriilse õhu samaaegse tarnimisega. Fermentaatorid on konstrueeritud autonoomsete süsteemidena, mis reguleerivad automaatselt temperatuuri ja keskkonna pH-d. Fermentaatorid teostavad ka pidevat (voolu)kultuuri, mille puhul erinevalt partiikultuurist tarnitakse söötmesse automaatselt värskeid toitekomponente kiirusega, mis on võrdne kasvatatud bakterikultuuri sarnase mahu eemaldamisega. Sellist pidevat kasvatamist hästi reguleeritud süsteemis saab põhimõtteliselt jätkata lõputult.
Anaeroobsete bakterite kasvatamine. Kohustuslikud anaeroobid on bakterid, milles energia ja konstruktiivne ainevahetus toimub ilma molekulaarse hapnikuta 02. Sellistes mikroorganismides hingamisprotsessis lõplikud aktseptorid
elektronid on süsinikmonooksiid (IV), sulfaadioonid, fumaraat jne. Lisaks avaldab molekulaarne hapnik kahjulikku mõju paljudele anaeroobidele. Näiteks surevad ranged anaeroobid madala hapnikusisalduse korral (bakteroidid, fusobakterid), mõõdukad anaeroobid on vähem tundlikud ( C. perfringens), võivad aerotolerantsed anaeroobid normaalsetes atmosfääritingimustes kasvada (piimhappebakterid). Enamik patogeenseid anaeroobe liigitatakse rangeteks või mõõdukateks anaeroobideks. Nende kasvatamiseks kasutatakse spetsiaalseid toitekeskkondi ja gaasisegusid. Anaerostaadid täidetakse viimasena.
Kohustuslike anaeroobide kasvu vajalik tingimus ei ole mitte niivõrd molekulaarse hapniku puudumine, kuivõrd toitainekeskkonna madal TRC. Järsult redutseerivad tingimused saavutatakse redutseerivate (redutseerivate) ainete lisamisega söötmetele ja samal ajal nendest molekulaarse hapniku eemaldamisega. Tabelis 1 loetletud keemilised ühendid lisatakse toitekeskkonda redutseerivate ainetena.
1. Redutseerivad ained anaeroobide kasvatamiseks
Samal eesmärgil lisatakse toitainekeskkonda keedetud maksa-, lihas-, ajutükke, verehüübeid, kanamunavalgeid ja rukkiterasid. Arvatakse, et SH-rühmade rikastel ainetel on nendes kudedes tugev redutseeriv toime.
Anaerobioosi tingimuste loomiseks vabastatakse toitainekeskkond nii palju kui võimalik hapnikust keetmise teel, samuti inertsete gaaside juhtimisega läbi vedela keskkonna või toitekeskkonna pinnale vaseliini kihistamise teel, et vältida kokkupuudet õhuhapnikuga.
Liha-peptoonmaksapuljong (MPLP) Kitta-Tarozzi on traditsiooniline sööde anaeroobide kasvatamiseks. Selle aluseks on maksavesi, mis valmistatakse väikeste veisemaksatükkide keetmisel vees (suhtes 1:1). Maksavesi segatakse MPB-ga vahekorras 1:2, segu keedetakse, reguleeritakse vajalik pH ja valatakse 10 ml katseklaasidesse. Katseklaasidesse lisatakse keedetud maksa tükid (redutseeriv aine) ja seejärel 2 ml vaseliiniõli. Autoklaavis 0,5 atm juures 20 minutit. Enne kasutamist keedetakse katseklaasid koos söötmega veevannis, seejärel jahutatakse ja alles seejärel inokuleeritakse.
Anaeroobide kasvatamiseks kasutatakse ka kõrge viskoossusega toitaineid, kuna hapniku difusioon neis on keeruline.
Poolvedel agar: lisage MPB-le 0,25...0,75% agarit ja 1% glükoosi, seadke pH 7,4-ni, valage kõrge kolonni katseklaasidesse ja steriliseerige fraktsionaalselt.
Nad harjutavad anaeroobide kasvatamist tihedas keskkonnas.
Suhkruagar Veyoni katsutites: lisage 1% glükoosi 2% MPA-le, seadke pH väärtuseks 7,4. Külvimaterjal lisatakse sulatatud segule ja jahutatakse temperatuurini 48...50 "C, segatakse ja valatakse steriilsetesse kitsastesse klaastorudesse – Veyoni torudesse (pikkus 20...25 cm, läbimõõt 1...1,5 cm). torude otsad suletud steriilsete kummikorkidega.Toitekeskkonna paksuses kasvavad anaeroobide kolooniad.
Laialdaselt kasutatakse anaeroobide kasvatamist tahke toitainekeskkonna pinnal Petri tassides.
Anaeroobide kasvatamiseks kasutatavate tahkete söötmete hulgas kasutatakse sageli vereagarit glükoosiga ja raudsulfitagarit.
Glükoosi-vereagar: kuni 3% MPA (pH 7,2...7,4), sulatada ja jahutada temperatuurini 50°C, lisada 1...2% steriilset glükoosilahust, 15...20% defibriini -lambavere vann ja valati Petri tassidesse.
Raudsulfiitagar (Wilson-Blairi sööde): 100 ml 3% MPA-le (pH 7,4) 1% glükoosiga temperatuuril 60 °C lisage 10 ml 20% naatriumsulfiti lahust ja 1 ml 8% raudkloriidi lahust , seejärel valatakse sööde Petri tassidesse. Anaeroobid redutseerivad sellel söötmel kasvades naatriumsulfiti naatriumsulfaadiks, mis reageerib raudkloriidiga, moodustades musta raudsulfiti sademe; bakterikolooniad on musta värvi.
Anaeroobide kasvatamiseks tahke toitekeskkonna pinnal ei piisa neile redutseerivate ainete lisamisest. Kultiveerimisanumad põllukultuuridega asetatakse suletud kambritesse (anaerostaadid), milles luuakse ühel või teisel viisil anaeroobsed (hapnikuvabad) tingimused.
Tavaline anaerostaat on metallist silinder, mis on hermeetiliselt suletud kummitihendiga kaanega (joonis 36). Kaanel on manomeeter ja kraanid õhu väljapumpamiseks või anaerostaadi täitmiseks inertgaasiga (lämmastik). Õhk pumbatakse välja vaakumpumba abil, ventiil pingutatakse ja anaerostaat koos katseklaaside või tassidega asetatakse termostaadi. Tavaline jääkrõhk anaerostaadis on umbes 10 mm Hg. Art. Loodud on anaerostaadid, millest hapniku eemaldamine toimub selle reaktsiooni tõttu vesinikuga
katalüsaatori (plaatina, pallaadium) olemasolu. Vesinik pumbatakse kambrisse silindrist läbi reduktori. Mõned anaeroobsed kambrid on varustatud termostaatilise seadmega kütteelementidega, mis hoiab iseseisvalt temperatuuri vajalikul tasemel.
Mikroaerofiilsete bakterite kasvatamine. Kuigi mikroaerofiilsed bakterid on hingamistüübilt aeroobid, ei kasva nad normaalses atmosfääris (21% hapnikku), vaid vähendatud hapnikusisaldusega. Näiteks, Kampülobakteri loode kasvab atmosfääris, mis ei sisalda rohkem kui 6% hapnikku. Sellist atmosfääri saab luua suletud termostaatides, anaerostaatides, asendades osa õhust silindrist tuleva kokkusurutud süsinikmonooksiidiga (IV) või tavapärases eksikaatoris. Viimasel juhul asetatakse katseklaasid koos põllukultuuridega koos alkoholiga niisutatud vati või küünlaga pudeliga eksikaatorisse. Vatt (küünal) süüdatakse ja eksikaatori kaas suletakse. Leek kustub hapniku läbipõlemisel ja selle sisalduse vähenemisest piisab mikroaerofiilide kasvuks.
Mikroaerofiilide kultiveerimiseks on kõige ligipääsetavam ja efektiivsem meetod poolvedelas söötmes 0,1...0,4% agariga. Sellises keskkonnas ei suuda konvektsioonivoolud segada söötme ülemisi hapnikurikkaid kihte alumistega, mistõttu tekib katseklaasi täitvas keskkonnas hapnikukontsentratsiooni gradient. Mikroaerofiilne kultuur nakatatakse torkega ja mikroorganism kasvab optimaalse hapnikusisaldusega tsoonis, tavaliselt õhukeste ketaste kujul, mis asuvad söötme pinnast mitme millimeetri kuni mitmekümne millimeetri kaugusel.
Seenekasvatus. Parimat seente kasvu täheldati süsivesikute sisaldusega söötmel 1...4%. Esmase isoleerimise ajal lisatakse kultuurisöötmele sageli antibiootikume, et pärssida erinevate seotud bakterite kasvu.
Sabouraud agarit kasutatakse dermatomükoosi ja kandidoosi patogeenide kultiveerimiseks. Glükoos - 4 g, peptoon - 1 g, agar - 1,8 g, destilleeritud vesi - 100 ml. Pärast agari lahustamist sööde filtreeritakse, valatakse katseklaasidesse ja steriliseeritakse 0,5 atm juures 30 minutit. Pärast steriliseerimist on söötme pH 6,9...7,0.
Capek agarit kasutatakse paljude seente kasvatamiseks. Glükoos - 30 g, naatriumnitraat - 2 g, kaaliumdivesinikfosfaat - 1, magneesiumsulfaat - 0,5 g, kaaliumkloriid - 0,5 g, raudsulfaat - 0,0012 g, agar - 20 g, destilleeritud vesi - 1000 ml. Keskkonna loomulik pH on 5,6...5,9. Söödet steriliseeritakse 0,5 atm juures 30 minutit.
Virdeagar on ette nähtud dermatomükoosi ja kandidoosi patogeenide kasvatamiseks. Humalamata linnasevirre lahjendatakse kraaniveega vahekorras 1:2 (suhkrusisalduseni 7%), pH seatakse 6,5...6,7, lisatakse 2% agarit, keedetakse, filtreeritakse, steriliseeritakse 0,5 atm juures. 30 minutit..
Litmani agar sobib dermatofüütide kasvatamiseks. Peptoon - 10 g, glükoos - 10 g, härja sapp - 15 g, kristallviolet - 0,01 g, agar - 20 g, destilleeritud vesi - 1000 ml. Söödet steriliseeritakse 1 atm juures 15 minutit.
Van Itersoni sööde on ette nähtud toksiliste seente eraldamiseks söödast, mis põhjustavad stahhüborüotoksikoosi, dendrodohiotoksikoosi jne. Ammooniumnitraat - 0,5 g, kaaliumdivesinikfosfaat - 0,5 g, kraanivesi - 1000 ml. Söödet steriliseeritakse 1 atm 30 mc juures. Seejärel niisutatakse söötmega steriilsed Petri tassid koos filterpaberiga.
Czapeki vedel sööde. Glükoos - 30 g, naatriumnitraat - 2 g, kaaliumdivesinikfosfaat - 1 g, magneesiumsulfaat - 0,5 g, kaaliumkloriid - 0,5 g, raudsulfaat - 0,001 g, destilleeritud vesi - 1000 ml. Söödet steriliseeritakse 0,5 atm juures 30 minutit. Pärast steriliseerimist on keskkonna pH 5,9...6,2. Vedelat söödet saab kasutada Petri tassides filterpaberi niisutamiseks, et hiljem seeni kasvatada.
Bilay sööde on ette nähtud seente makrokoniidide saamiseks. Kaaliumnitraat - 2 g, kaaliumdivesinikfosfaat - 1 g, magneesiumsulfaat - 0,5 g, kaaliumkloriid - 0,5 g, raudsulfaat - jäljed, lahustuv tärklis - 0,1 g, sahharoos - 0,1 g, glükoos - 0,1 g, 1000 destilleeritud vesi ml. Sööde valatakse 5 ml katseklaasidesse ja igasse katseklaasi sisestatakse filterpaberi riba nii, et suurem osa sellest on lahuse kohal. Söödet steriliseeritakse 1 atm juures 20 minutit.
Sabouraud glükoosipuljongit kasutatakse mitut tüüpi seente kasvatamiseks. Glükoos - 40 g, peptoon - Lõuna, destilleeritud vesi - 1000 ml. Kuumuta keemiseni, vala katseklaasidesse ja steriliseeri 1 atm juures 15 minutit.
Dermatofüütide isoleerimiseks kasutatakse karvadel kasvatamist vastavalt Van Breusegemile. Terved steriilsed juuksed kinnitatakse kolloodiumiga klaastoru külge. Seenekultuur kantakse juuste keskele. Toru asetatakse silindrisse, mille põhja valatakse niiskuse tagamiseks väike kogus vett. Kasvatage 25°C juures viis kuni kümme päeva või kauem.
Vereagarit kasutatakse histoplasmoosi ja episootilise lümfangiidi patogeenide isoleerimiseks.
ÜLESANDED ISESEISEV TÖÖKS
1. Valmistage ette MPA kaldproov, seerum ja veri
MPA.
2. Uurige anaerostaadi ja fermentaatori ehitust.
Kontrollküsimused
1.Millised on üldised nõuded toitainekeskkonnale?
2.Millistesse rühmadesse toitekeskkonnad liigitatakse?
Kuidas kasvatatakse anaeroobe ja mikroaerofiile?
Toitekeskkonnad on bakterioloogiliste uuringute aluseks. Nende eesmärk on isoleerida uuritavast materjalist mikroobide puhaskultuurid ja uurida nende omadusi. Toitekeskkond loob optimaalsed tingimused mikroorganismide paljunemiseks. Sööde peab sisaldama tsütoplasma kõigi komponentide ehituseks vajalikke aineid, s.t. kõik elusorganismi kasvuallikad. Need hõlmavad peamiselt lämmastiku, süsiniku, vesiniku ja hapniku allikaid.
Vesiniku ja hapniku allikaks toitekeskkonnas on vesi. Lämmastiku allikaks on orgaanilised ühendid, mida saadakse lihast, kalast, platsentast, piimast, munadest ja verest. Pankreatiini või trüpsiiniga hüdrolüüsi tulemusena tekivad need tooted nn. hüdrolüsaadid, mis sisaldavad suures koguses aminohappeid ja peptoone, mida enamik mikroorganisme hästi omastab. Looduslikku valku seedivad ainult mõned mikroorganismid, millel on eksoproteaase. Hüdrolüsaadid on paljude mikroorganismide söötme ettevalmistamise aluseks.
Patogeensete mikroobide süsinikuallikaks on peamiselt erinevad süsivesikud: mono- ja disahhariidid, mitmehüdroksüülsed alkoholid, orgaanilised happed ja nende soolad.
Lisaks organogeenidele vajavad bakterid anorgaanilisi ühendeid, mis sisaldavad fosforit, kaaliumi, väävlit, naatriumi, magneesiumi, rauda, aga ka mikroelemente: koobaltit, joodi, mangaani, boori, tsinki, molübdeeni, vaske jne.
Mikroorganismide vajadus anorgaaniliste ühendite järele rahuldatakse toitekeskkonda soolade KH2PO4 K2HPO4 jt lisamisega Keemiliste protsesside katalüsaatorina toimivaid mikroelemente on vaja tühistes kogustes ning need sisenevad toitainekeskkonda peptooni, anorgaaniliste soolade ja veega. Koos loetletud orgaaniliste elementidega vajavad paljud mikroorganismid kasvufaktoreid, s.t. ainetes, mida nad ise sünteesida ei suuda. Toitesöötmetele tuleb lisada kasvufaktoreid valmis kujul. Kasvufaktoriteks on erinevad vitamiinid, mille allikaks toitekeskkonnas on toitekeskkonda lisatud taimset ja loomset päritolu tooted, mis sisaldavad nikotiin-, pantoteen-, parabensoehappeid, vitamiine A, B, C jne.
Toitaineid saavad mikroobid omastada ainult teatud keskkonnareaktsiooni käigus, sest mikroobide rakumembraanide läbilaskvus muutub sõltuvalt keskkonna pH-st.
Nõuded toitekeskkonnale.
1. Kultuurisöötmed peavad sisaldama mikroobide toitmiseks vajalikke toitaineid.
2. Kasvatava mikroobi tüübi jaoks optimaalne pH-reaktsioon. -
3. Toitekeskkond peab olema piisava niiskuse ja viskoossusega, sest mikroobid toituvad difusiooni- ja osmoosiseaduste järgi.
4. Olge isotooniline ja teatud redokspotentsiaaliga (rH2).
5. Kultuurisöötmed peavad olema steriilsed, tagades sellega puhaskultuuride kasvatamise võimaluse.
Toitainete vajadus ja füüsikalised tingimused eri tüüpi mikroobide jaoks ei ole ühesugused ja see välistab universaalse toitekeskkonna loomise võimaluse.
Konsistentsi alusel eristatakse tahket ja vedelat toitainekeskkonda. Tihedad valmistatakse vedelate baasil, lisades neile kleepuvaid aineid: agar-agarit või želatiini! Agar-agar (malai keeles tarretis) on taimset päritolu toode, mis on ekstraheeritud merevetikatest. Agar-agar lahustub vees temperatuuril 80-86°C, kõveneb temperatuuril 36-40 ja seetõttu kasutatakse toitekeskkonna tihendamiseks erinevate mikroorganismide rühmade kasvatamiseks nende optimaalsel temperatuuril.
Toitekeskkondi klassifitseeritakse nende koostise ja otstarbe järgi.
1.Koostise alusel jagatakse toitainekeskkond lihtsateks ja keerukateks
On rühm üldotstarbelisi keskkondi – lihtsad. Sellesse rühma kuuluvad liha-peptoonpuljong (lihtne toitainepuljong), liha-peptoonagar (lihtne toitaineagar), toitev želatiin. Neid söötmeid kasutatakse paljude patogeensete mikroobide kasvatamiseks. Üldotstarbelised söötmed ehk lihtsad toitekeskkonnad valmistatakse tavaliselt hüdrolüsaatidest, lisades peptooni ja naatriumkloriidi. Neid kasutatakse ka keeruka kandja ettevalmistamisel.
2. Teise rühma kuuluvad valik-, eri- ja diferentsiaaldiagnostilised keskkonnad.
Valikkeskkonnad (selektiivne, selektiivne, akumulatsioon, rikastamine). Selektiivse toitekeskkonna loomise põhimõte põhineb kultiveerimiseks mõeldud mikroobitüübi põhiliste biokeemiliste ja energiavajaduste rahuldamisel või kaasneva mikrofloora kasvu pärssivate inhibiitorite lisamisel. Toitainete, mikroelementide, kasvufaktorite teatud koostis ja kontsentratsioon rangelt määratletud pH väärtusel või inhibiitorite lisamine loovad optimaalsed tingimused üht või mitut tüüpi mikroorganismide kasvatamiseks. Neile erinevate mikroobide segu sisaldava materjali külvamisel närbub esimesena nende liikide kasv, mille jaoks keskkond on valikuline. Valikulised söötmed on näiteks munakollane puljong, seleniitpuljong, Ploskirevi sööde - soolestiku perekonna mikroobide kasvatamiseks, aluseline peptoonvesi - Vibrio cholerae jaoks.
Mullapuljong. MPB-le lisatakse 10-20% härjasappi. Sapp pärsib kokkide ja õhufloora kasvu, kuid on soodne salmonella vohamiseks.
Seleniidi puljong. See koosneb fosfaatpuljongist, millele on lisatud seleniidi naatriumsoola, mis pärsib kokkide taimestiku ja Escherichia coli kasvu, kuid ei pidurda salmonella kasvu.
Kolmapäev Ploskireva. Tihe sööde, mis sisaldab E. coli, coli inhibiitoreid, kuid on soodne Shigella ja Salmonella kasvuks, mille paljunemist ei pidurda briljantrohelised ja sapisoolad.
Peptoonvesi. Sisaldab 1% peptooni ja 0,5% naatriumkloriidi. Keskkond on kloori vibrioonide suhtes selektiivne, sest nad paljunevad teistest bakteritest paremini "näljases keskkonnas", eriti leeliselise reaktsiooniga, sest nad eritavad ise happelisi jääkaineid.
Erilised keskkonnad. Vajalik bakterite kasvatamiseks, mis ei kasva lihtsal toitekeskkonnal. Mõnede organismide jaoks on vaja lihtsasse toitainekeskkonda lisada süsivesikuid, verd ja muid täiendavaid toitaineid. Lihtsad toitesöötmed on näiteks suhkrupuljong ja suhkruagar streptokoki jaoks (valmistatakse vastavalt MPB-st ja MPA-st, millele on lisatud 0,5-2% glükoosi).
Pneumokokkide ja meningokokkide puhul on spetsiaalseks söötmeks vadakupuljong ja vadakuagar (vadakupuljongi valmistamiseks segatakse 1 osa MPB-d 2 osa värske seerumiga, vadakuagari saamiseks lisatakse sulale 10-25% steriilset hobuse või veise seerumit MPA).
Uuritava mikroobi liigi määramiseks kasutatakse diferentsiaaldiagnostilist söödet, lähtudes tema ainevahetuse omadustest. Eesmärgi järgi jagunevad diferentsiaaldiagnostika keskkonnad järgmiselt:
1. Sööde mikroobide proteolüütilise võime tuvastamiseks, mis sisaldab piima, želatiini, verd jne.
2. Süsivesikute ja mitmehüdroksüülsete alkoholidega sööde
erinevate sahharolüütiliste ensüümide tuvastamine.
Sahharolüütiliste omaduste ja redoksensüümide tuvastamiseks mõeldud diferentsiaaldiagnostika söötme koostisele lisatakse indikaatorid: neutraalne punane, happeline fuksia, bromotümoolsinine, roosa happega sinise vesilahus (BP). Muutes selle värvi erinevatel pH väärtustel, näitab indikaator ensüümi olemasolu ja söötmesse sisestatud koostisosa lagunemist.
Diferentsiaaldiagnostika keskkondade näited:
Endo keskkond. Koosneb MPA-st, millele on lisatud 1% laktoosi ja aluselist fuksiini (indikaator), mis on värvitu naatriumsulfitiga. Endo medium on kergelt roosaka värvusega. Kasutatakse sooleinfektsioonide diagnoosimisel, et eristada baktereid, mis lagundavad laktoosi happeliste produktide moodustamiseks bakteritest, millel see võime puudub. Laktoosipositiivsete mikroobide (Escherichia coli) kolooniad on fuksiini vähenemise tõttu punased. Laktoosnegatiivsete mikroorganismide – salmonella, shigella jt – kolooniad on värvitud.
Diferentsiaaldiagnostika keskkonnad hõlmavad lühikest ja laiendatud kirjut seeriat. See koosneb söötmest, mis sisaldab süsivesikuid (Hiss media), MPB-d, piima ja liha-peptoonželatiini.
Hissi sööde valmistatakse peptoonvee baasil, millele lisatakse keemiliselt puhtaid mono-, di- või polüsahhariide (glükoos, laktoos, tärklis jne).
Hapete moodustumise ja süsivesikute lagunemise tagajärjel tekkivate pH muutuste tuvastamiseks lisatakse söötmele indikaator. Süsivesikute sügavamal lagunemisel moodustuvad gaasilised tooted (CO2, CH4 jne), mis püütakse kinni ujukite abil - väikesed katseklaasid, mis lastakse tagurpidi söötmesse. Süsivesikuid sisaldavat söödet saab valmistada ka tiheda söötmena, lisades 0,5–1% agar-agarit. Seejärel tuvastatakse gaasi moodustumine mullide (katkestuste) moodustumisega keskkonna kolonnis.
Motley sarja kuuluval MPB-l leidub aminohapete ja peptoonide (indool, vesiniksulfiid) lagunemisel tekkinud tooteid. Vesiniksulfiid tuvastatakse, asetades pärast kultuuri külvamist MPB-sse pliatsetaadi lahuses leotatud filterpaberi riba. Väävlit sisaldavate aminohapete lagunemisel eraldub vesiniksulfiid ja paber muutub pliisulfiidi moodustumise tõttu mustaks. Indooli määramiseks saab kasutada kompleksindikaatorit. Indool moodustub trüptofaani lagunemisel ja seda saab tuvastada, kui see indikaator lisatakse MPB-l kasvatatud kultuurile. Indooli juuresolekul muutub MPB roheliseks või siniseks.
Kuivad keskkonnad.
Toitaineagarit, nagu ka peamisi diferentsiaaldiagnostika söötmeid, toodetakse praegu kuivade preparaatidena, mis sisaldavad kõiki vajalikke komponente. Sellistele pulbritele peate lisama ainult vett ja keema ning pärast valamist steriliseerima.
Kultuurisöötmete klassifikatsioon:
Loomulik– koosnevad loomse või taimse päritoluga saadustest ja nende keemiline koostis on ebaselge. Näiteks: köögivilja- ja puuviljamahlad, loomsed koed, veri, piim, munad jne. (IPA, MPB).
Poolsünteetiline– koostis sisaldab teadaoleva keemilise olemusega ühendeid ja tundmatu koostisega aineid. Näiteks: MPB glükoosiga, Endo sööde, Sabouraud sööde.
Sünteetiline– sisaldavad ainult täpses kontsentratsioonis keemiliselt puhtaid ühendeid. Kasutatakse laboratoorsetes katsetes. Näiteks: Chapeki, Omeljanski, Ušinski jne keskkond.
Kultuurisöötme eesmärk
Universaalne(üldotstarbeline) - sobib mitmete mikroorganismide kasvatamiseks ja kasutatakse spetsiaalsete toitekeskkondade alusena. Näited: MPB, MPA, Hottingeri sööde, GRM, tioglükolaadi sööde.
Eriline kasutatakse juhtudel, kui mikroorganismid ei kasva lihtsal söötmel. Nende hulka kuuluvad veri, seerumagar, vadakupuljong, astsiitpuljong, astsiidiagar ja teised.
1. Valikkeskkonnad- mõned mikroorganismid kasvavad neil kiiremini ja intensiivsemalt kui muud tüüpi bakterid. Näiteks 1% aluseline peptoonvesi on valikuline sööde vibrios koolera, Roux ja Leffleri sööde difteeria patogeenide jaoks.
2. Valikuline – tänu selektiivsetele lisanditele (sapp, värvid, antibiootikumid jne) suudavad nad teatud tüüpi mikroorganismide arengut pärssida, kuid ei mõjuta teisi tüüpe. Näited: Mülleri sööde on selektiivne tüüfuse-paratüüfuse bakterite suhtes, furasolidoon-tween agar on selektiivne korünebakterite ja mikrokokkide suhtes. Antibiootikumide lisamine söötmele muudab need seente suhtes selektiivseks (nt Sabouraud sööde jne).
3. Diferentsiaaldiagnostika- söötmete rühm, mis võimaldab määrata mikroorganismide biokeemilisi omadusi ja neid eristada. Need jagunevad proteolüütiliste, peptolüütiliste, sahharolüütiliste, hemolüütiliste, lipolüütiliste ja redutseerivate omaduste määramiseks söötmeteks (Endo, Levin, Ploskirev, Gissa söötmed).
4. Säilitusaine (transport) -
mõeldud mikroorganismide elujõulisuse säilitamiseks kogumise hetkest alates
biomaterjal enne külvi diagnostikaks
Vedelik(puljongid) – mikroorganismide biomassi füsioloogiliste ja biokeemiliste omaduste ning akumulatsiooni uurimine
Poolvedel(1% agar) – kultuuride säilitamine ja anaeroobide kasvatamine
Tihe(3-5% agar) – puhaste kultuuride eraldamine, akumulatsioon, kvantitatiivne registreerimine, kultuuriliste omaduste uurimine, antagonistlikud suhted
Mass– seemnete ladustamine tööstuses (hirss, kliid)
Kuiv– tööstuslikult toodetud toitekeskkonna valmistamiseks
Transpordisüsteem Stuarti keskkonnaga
Stewarti sööde on pooltahke, toitainetevaene substraat paljude patogeensete mikroorganismide, nagu näiteks, säilitamiseks ja transportimiseks. Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp. jne. Kõige nõudlikumad mikroorganismid elavad selles keskkonnas üle ööpäeva, teised – kuni mitu päeva.
Tioglükolaadi olemasolu söötmes pärsib bakterite ensümaatilist aktiivsust ja lämmastiku puudumine takistab nende paljunemist.
Transpordisüsteem koos keskkonnaga Keri Blair
Keri Blairi transpordikeskkond on Stewarti põhilise transpordisöötme modifikatsioon, mis on loodud spetsiaalselt väljaheiteproovide jaoks.
Glütserofosfaat, mis on mõnede enterobakterite metaboliit ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, jne), asendatud anorgaanilise fosfaadiga,
Metüleensinine eemaldati ja söötme pH tõsteti 8,4-ni.
Keri Blairi sööde võimaldab säilitada enamikku patogeene, sealhulgas nõudlikke mikroorganisme nagu Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp..
See keskkond on standardne anaeroobide transportimiseks.
Transpordisüsteem Amesi keskkonnaga
Amesi transpordikeskkond on Stewarti põhilise transpordisöötme teine modifikatsioon, milles glütserofosfaat on asendatud anorgaanilise fosfaadiga, kuna glütserofosfaat on mõne enterobakteri metaboliit ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae jt.) ja võib toetada mõnede gramnegatiivsete mikroorganismide kasvu.
Metüleensinine on asendatud farmatseutilise aktiivsöega.
Söötmele lisati bakterirakkude läbilaskvuse säilitamiseks kaltsiumi ja magneesiumi.
See keskkond on võimeline toetama mikroorganisme nagu Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae jne, kuid parimad tulemused saavutatakse kasvatamisel esimese 24 tunni jooksul.
Universaalne rikastuskeskkond: lihapeptoonagar (MPA) ja lihapeptoonpuljong (MPB)
Need on peamised söötmed mikroorganismide inokuleerimiseks, et kontrollida kultuuride puhtust enne biokeemilist ja serotüpiseerimist.
Neid kasutatakse tagasihoidlike mikroorganismide kasvatamiseks ja loendamiseks. Poolvedelal kujul saab söödet kasutada kontroll- (referents)mikroorganismide säilitamiseks.
Universaalsed salvestuskeskkonnad Hottingeri keskkond
Mõeldud erinevate mikroorganismide, nagu enterobakterid, Pseudomonas aeruginosa, stafülokokid ja teatud tüüpi streptokokid, kasvatamiseks. Vajadusel võib seda rikastada süsivesikute ja sooladega.
Sisaldab Hottingeri hüdrolüsaati, mis saadakse hakkliha (veiseliha) ensümaatilisel hüdrolüüsil pankreatiiniga, millele järgneb filtreerimine ja kloroformi lisamine säilitusainena.
Universaalsed salvestuskeskkonnad:Mueller-Hintoni keskkond
Seda söödet kasutatakse kasvatamiseks Neisseria sp. ja määrata mikroorganismide tundlikkust antimikroobsete ainete suhtes.
Kolmapäev McConkey
MacConkey söödet soovitatakse diferentsiaalsöötmena enterobakterite ja nendega seotud gramnegatiivsete batsillide selektiivseks isoleerimiseks.
Laktoosipositiivsed tüved kasvavad roosade või punaste kolooniatega, mida võib ümbritseda sappsoola sadenemise tsoon.
Punane värvus ilmneb söötme hapestumisel laktoosi laguproduktide poolt (kui pH langeb alla 6,8) ja neutraalse punase adsorptsiooni tulemusena.
Laktoosi mittekäärivad tüved (Shigella, Salmonella) moodustavad tavaliselt läbipaistvaid värvituid kolooniaid ega muuda keskkonda.
Diferentsiaaldiagnostika keskkonnad:Endo keskkond
Selle söötme töötas välja Endo kui kultiveerimissöödet laktoosi käärivate ja mittekäärivate mikroorganismide eristamiseks. Seda kasutatakse vee, reovee, piimatoodete ja muude toiduainete mikrobioloogiliseks uurimiseks.
Naatriumsulfit ja aluseline fukssiin omavad grampositiivseid mikroorganisme pärssivalt. Laktoosi lagundavad mikroorganismid aldehüüdiks ja happeks. Aldehüüd omakorda vabastab fuksiani-sulfiti kompleksist fuksiini, mis suurendab kolooniate punast värvi. E. coli puhul on see reaktsioon väga väljendunud ja sellega kaasneb fuksiini kristalliseerumine, mis väljendub kolooniate roheka metallilise läikena (muchsin läige).
Diferentsiaaldiagnostika keskkonnad:Kollase soola agar
Seda söödet kasutatakse selektiivse söötmena kliiniliselt oluliste stafülokoki kultuuride isoleerimiseks.
Mannitool on kääritav ja eristuv substraat ning süsinikuallikas.
Munakollase emulsiooni lisamine (kuni 5 mahuprotsenti) võimaldab määrata mikroorganismide lipaasi aktiivsust. Emulsioon soolases keskkonnas muutub läbipaistvaks, mistõttu lipaasi aktiivsuse juuresolekul moodustub kolooniate ümber kollane läbipaistmatu tsoon.
Diferentsiaaldiagnostika keskkonnad:Wilson-Blair või vismutsulfiitagar
Selektiivne sööde Salmonella isoleerimiseks.
Loomsete kudede peptiline seedimine ja lihaekstrakt on nende bakterite kasvuks vajalike lämmastikku sisaldavate toitainete, süsiniku, väävli, B-vitamiinide ja mikroelementide allikas.
Briljantroheline pärsib kõigi grampositiivsete bakterite kasvu. Glükoos on kääritatav süsivesik. Raudsulfaat suudab tuvastada vesiniksulfiidi tootmist.
Vismut on raskmetall, mis pärsib enamiku gramnegatiivsete soolebakterite, välja arvatud salmonella, kasvu.
Salmonella redutseerib raudsulfaadi glükoosi ja vismutsulfiti juuresolekul raudsulfiidiks, mis muudab nende kolooniad mustaks.
Valikainete erikeskkonnad:Loeffleri keskkond
Seda söödet, millele on lisatud hobuse seerumit, kasutatakse kasvatamiseks Corynebacterium diphtheriae kliinilisest materjalist ja nende mikroorganismide puhaste kultuuride subkultuuridest.
Kõrge seerumikontsentratsioon aitab määrata mikroorganismide proteolüütilist aktiivsust ja pigmendi moodustumist. Peptoon ja lihaekstrakt varustavad mikroorganismid oluliste toitainetega. Glükoos on kääritav substraat ja energiaallikas.
Spetsiaalne selektiivne kandja:Kampilobakagar
Kampülobakteri selektiivne sööde, mis koosnes lamba- või hobuseverega vereagar-alusest ja antibiootikumidest.
Antimikroobsed komponendid pärsivad oluliselt normaalse mikrofloora kasvu, soodustades kasvu ja eritumist väljaheitega Campylobacter fetus ssp. jejuni.
Amfoteritsiin B sisaldus toidulisandis pärsib oluliselt või täielikult seente kasvu, hiljem sisestatud tsefalotiin suurendab soolestiku normaalse mikrofloora pärssimist.
Kolooniad Campylobacter fetus ssp. jejuni on limane iseloom, lame hall ebakorrapäraste piirjoontega või kõrgendatud, ümar, ilma hemolüüsita.
Mõned tüved võivad tekitada kollakaspruune või roosakaid kolooniaid.
Söötme niiskel pinnal võib tekkida kasv või sülemlemine.
Valikulised söötmed tutvustasid mikrobioloogilisse praktikasse S. N. Vinogradsky ja M. Beyerinck. Need on toitekeskkonnad, milles ühe või mitme keemilise ühendi lisamisega luuakse optimaalsed tingimused ühte tüüpi mikroorganismide (või nendega seotud mikroorganismide rühma) kasvuks ja paljunemiseks ning ebasoodsad tingimused kõigile teistele. Selliseid söötmeid kasutatakse peamiselt mikroorganismide puhaskultuuri eraldamiseks nende looduslikest elupaikadest ja kultuuride masside kogumiseks (puhaskultuuri eraldamise keemiline meetod). Näiteks toitekeskkond, milleks on kalgendatud hobuseseerum, on selektiivne sööde difteeriabakteritele, aluseline peptoonvesi Vibrio cholera jaoks, sapipuljong kõhutüüfuse tekitajale, maksapuljong Brucellale jne.
Mikroobide kogunemine selektiivsesse toitainekeskkonda on paljudel juhtudel oluline eeletapp puhaskultuuride eraldamisel algsetest katsematerjalidest (näiteks Vibrio cholerae või tüüfusebakterid patsientide või kandjate väljaheitest jne).
Mida mõistate erineva toitainekeskkonna all?
Diferentsiaaldiagnostika söötmed on need, mis sisaldavad lisaks mikroorganismide kasvu ja arengut tagavatele ainetele teatud ensüümide substraadina kasutatavaid aineid. Substraadi kvalitatiivse muutuse põhjal määratakse konkreetse ensüümi olemasolu (hinnatakse indikaatori abil, mis reageerib substraadi lagunemissaaduste esinemisele toitekeskkonnas).
Iga mikroorganismi tüüpi iseloomustab üsna stabiilne ensüümide komplekt. Ensüümide komplekti määramine diferentsiaaldiagnostika söötme abil võimaldab eristada mikroorganismide tüüpe. Näiteks vereagar võimaldab tuvastada ensüümi hemolüsiini, His söödet - sahharolüütilisi ensüüme (süsivesikuid), želatiini kasutatakse mikroobide proteolüütiliste omaduste arvestamiseks jne.
Vere agar. Hemolüsiini ensüümi olemasolu hinnatakse punaste vereliblede hävimise ja vereagaril kasvatatud mikroobide ümber heleda tsooni moodustumise järgi.
Tema meedia. Ensüümide – karbohüdraaside olemasolust, mis lagundavad süsivesikud happeks, annab märku söötme pH muutus happelise poole suunas ja toitekeskkonna värvuse muutumine. Ensüümide komplekti erinevust saab kasutada nii isoleeritud kultuuri puhtuse kontrollimiseks kui ka ühe liigi kiireks eristamiseks teistest nakkusohtliku materjali inokulatsioonide esmasel uurimisel.
Keemilised reaktiivid
1. Mis on keemilised reaktiivid ja milleks neid kasutatakse?
Keemilised reaktiivid- ained, mida kasutatakse laboripraktikas erinevate keemiliste reaktsioonide läbiviimiseks.
Enamasti on keemilised reaktiivid üksikud ained, kuid üsna sageli on neil keeruline koostis. Keemiliste reaktiivide üldtunnustatud klassifikatsiooni ei ole, enamasti jagunevad need analüütilisteks keemilisteks reaktiivideks ja kõigeks muuks.
2. Millistel eesmärkidel neid kasutatakse veterinaarmeditsiinis?
Veterinaarmeditsiinis kasutatakse keemilisi reaktiive analüütilistel ja diagnostilistel eesmärkidel kliinilistes, veterinaar-sanitaar-, hügieeni-, ekspert-, biokeemilistes ja muudes laboratoorsetes uuringutes. Bioloogilises ja kliinilises praktikas kasutatavad ja arendatud uurimismeetodid nõuavad laia valikut keemilisi reaktiive, mis peavad vastama paljudele nõuetele. Näiteks vajavad kliinilised ja biokeemilised uuringud ensüümide jaoks kõrgelt puhastatud substraate, ensüüme endid, spetsiifiliste rühmade (SH, NH3, COOH rühmad jne) reaktiive jne. Anorgaaniliste ja orgaaniliste sünteeside läbiviimiseks, samuti kvalitatiivseteks ja kvantitatiivseteks analüüsideks, sh. veterinaar- ja sanitaarkontrolli käigus erinevates tööstusharudes, ravimite analüüs), toiduainete, õhu, vee jne veterinaar-, sanitaar- ja hügieenianalüüside läbiviimisel kasutatakse suurt hulka mitmesuguseid kõrgelt puhastatud keemilisi reaktiive.